游戏包括《新 超级路易吉U》和《新 超级马力欧兄弟U》共164个关卡，马力欧一行需要前往被酷霸王占领的桃花公主城堡，利用多种新奇的能力强化，与可靠有趣的伙伴，在丰富多彩的世界中展开冒险。在《新 超级路易吉U》中，关卡难度更高，限时更短，角色跳跃能力更强但也更易打滑，非常适合喜欢挑战的玩家。

游戏中有“马力欧”、“路易吉”、“奇诺比奥”、“偷天兔”和“奇诺比珂”5个角色供你选择，其中“奇诺比珂”与“偷天兔”拥有非常适合新手的特殊能力，即使不擅长动作游戏，也可以轻松游玩。

除了故事模式外，游戏还提供课题模式、加倍模式和金币对战多种丰富的玩法。游戏支持最多4人一起游玩，快与伙伴分享Joy-Con™，一起趣玩吧！