赛默飞世尔(原戴安)液相色谱操作规程 |
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一、操作前准备: 1.1流动相的配制: 1.1.1根据所供试品的性质、相关的文献资料、工作经验等按比例配制流动相。 1.1.2根据流动相的性质确定采用有机膜(0.45um)还是水相膜(0.45um)对流动相进行过滤。 1.1.3将过滤后的流动相进行超声脱气10~15分钟。 1.2对照品供试品处理: 1.2.1称取或量取适量的对照品或供试品,用适当的溶剂(最好采用流动相或流动相的主成分)进行充分溶解(也可借助超声波进行超声溶解),使其浓度为0.1~1mg/mL(根据检测结果再适当调节溶液的浓度)。 1.2.2根据对照品或供试品的性质确定采用有机针头滤膜(0.45um)还是水相针头滤膜(0.45um)进行过滤。 1.3色谱柱的选择:根据样品的性质选择适当的色谱柱。 二、开机: 2.1打开UPS(不间断电源)电源,打开仪器接线板电源开关; 2.2打开电脑显示器电源,打开电脑主机电源(POWER),启动电脑; 2.3依次打开泵、自动进样器、柱温箱、检测器的电源; 2.4双击屏幕右下角“服务管理器”快捷图标,出现对话界面后点击“启动仪器控制器”启动,等显示“本地仪器控制器 运行空闲”,可以关闭界面。 2.5双击在桌面上的Chromeleon 7图标(工作站主程序)。 2.6在左下方点击仪器,则在右边会自动显示该仪器控制面板。 2.7旋开泵上的排液阀(两圈以上);设置A通道为100%,点击“冲洗”,然后再出现的对话框中点击“忽略并执行”;(默认冲洗5分钟);然后分别“冲洗”流路中其他通道气泡;排完气泡后关闭排液阀; 2.8设置流动相的比例及流速后,点击“马达”。此时泵自动会以设置的流速进行运行。 2.9在控制面板“柱温箱”控制框中,设置准备分析样品所使用的柱温箱温度。 3.0清洗进样器:依次执行灌注注射器,清洗缓冲环,外部清洗针。 三、样品分析: 3.1建立仪器方法: 3.2建立处理方法及报告模板(此步骤可以省略,直接调用以前的): 3.3建立序列: 3.4打开氘灯(待系统压力稳定后约15min后再开灯):在控制面板“Detector”控制框中,选中“紫外灯”选框,及“可见灯”选框(如果波长在可见范围)。 3.5在控制面板“UV”控制框中,设置波长,采集频率(10HZ),时间常数(0.5s);点击“监视基线”,选中通道1并确定。 3.6待基线稳定后,点击“监视基线”,点击确定,关闭查看基线。 3.7点击左下方“数据”,并选中要分析的序列,然后点击“开始”启动样品表进行分析(如果序列里有完成的样品,则会变成继续,点继续;如果该序列还在队列中则会显示删除,点击删除后在点击继续); 3.8样品全部检测结束后,如果不再分析样品应立即关掉氘灯,延长氘灯使用的寿命 四、数据处理: 4.1处理标准曲线; 4.2打印标准曲线; 4.3打印样品报告。 五、关机: 5.1冲洗色谱柱(如果使用了缓冲盐,首先使用10%甲醇水溶液冲洗色谱柱30分钟,然后使用纯甲醇冲洗色谱柱30分钟)。 5.2关闭泵马达,断开连接,关闭工作站。 5.4关闭检测器、柱温箱、自动进样器、泵的电源。 5.5关闭计算机。关闭UPS电源或稳压电源。 六、注意事项: 6.1溶剂泵的使用注意事项: (1) 使用时要留心防止溶剂瓶内的流动相被用完,否则空泵运转会磨损柱塞、缸体和密封环,最终产生漏夜。 (2) 防止任何固体微粒进入泵体,因为尘埃或其他任何杂质微粒都会磨损柱塞、密封环、缸体和单向阀,因此应预先除去流动相中的任何固体颗粒。流动相过滤,可采用滤膜(0.2um或0.45um)等滤过。 (3) 输液泵的工作压力不能超过规定的最高压力,否则会使高压密封环变形,产生漏夜。 (4) 流动相应该先脱气,以免在泵内产生气泡,影响流量的稳定性,如果有大量的气泡, 泵就无法正常工作。 (5) 溶剂泵长期不用时,用甲醇以1.0ml/min冲洗各个通道。 (6) 泵的清洗液要勤换。 (7) 每次开启泵之前要排除管道中是气泡。 (8) 流动相由无机盐溶液转换有机溶剂前要用90%去离子水清洗管路。 (9) 转换不同流动相时注意两者是否容易混合或者发生反应。 (10)长期不用或运输前要到空清洗液瓶。 6.2色谱柱的使用注意事项: (1) 避免压力和温度的急剧变化及任何机械震动。温度的突然变化或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充状况;柱压的突然升高或降低也会冲动柱内填料,因此在调节流速时应该缓慢进行,进样阀的转动不能过缓。 (2) 一般说来色谱柱不能反冲,只有生产厂家指明该柱可以反冲时,才可以反冲除去留在柱头的杂质。否则反冲会迅速降低柱效。 (3) 选择使用适宜的流动相(尤其是pH),以避免固定相被破坏。有时可以在进样器前连接一预柱,分析柱是键合硅胶时,预柱为硅胶,可使流动相在进入分析之前被硅胶“饱和”,避免分析柱中的硅胶基质被破坏。 (4) 避免将基质复杂的样品尤其是生物样品直接注入柱内,需要对样品进行预处理或者在进样器和色谱柱之间连接一保护柱。保护柱一般是有相似固定相的短柱,也有用浸透限制固定相短柱。保护柱可以经常更换。 (5) 保存色谱柱时应将柱内充满乙腈或甲醇,柱接头要拧紧,防止溶剂挥发干燥。绝对禁止将缓冲液留在柱内静置过夜或更长时间。 6.3检测器的使用注意事项: (1) 长时间检测池中无流动相流动时,关闭检测器氘灯。 (2) 不要将物品或其他仪器档住检测器的散热孔。 (3) 检测器安装的位置应没有震动,温度变化不大,避免阳光直射。 (4) 在关灯命令发出后,再次开灯须等待5分钟以上的时间。否则灯会因为过热而损坏。 |
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