血清L

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血清L

2024-03-25 18:33| 来源: 网络整理| 查看: 265

一、 实验试剂:1. 150mmol/L Tris,60mmol/L双甘肽溶液:称取Tris9.1g,双甘肽3.96g,溶于400ml蒸馏水中,再加蒸馏水至500ml,加少氯仿防腐,置冰箱保存,此液PH约8.0(25℃)。2. 1mol/L HCL3. 底物缓冲浪(8mmol/L L-T-谷氨酸α-萘胺,54mmol/L双甘肽):称取L-T-谷氨酸α-萘胺(无结晶,MW272.3)217mg,置于小烧坏中,加人1mol/L盐酸约4ml,使完全溶解,再加人上述Tris双甘肽溶液90ml于25℃用lmoL/L盐酸调至PH8.0±0.1,然后加水至10Oml(此液在37℃,PH为7.8-7.9),置冰箱保存。4. 2g/L对氨基苯磺酸醋酸溶液(含醋酸20%),置冰箱保存。5. 1g/L亚硝酸钠水溶液,置冰箱保存。6. 显色剂:lg/L亚硝酸钠水溶液4ml,加2g/L对氨基苯磺酸溶液100ml,充分混匀,当天配用。二、 实验操作:取 16mm×100mm试管,按表操作:以上各管混匀后放置10min,在波长530nm,比色杯光径1.0cm,用对照管调零读取测定吸光度,查标准曲线。标准曲线绘制:l. 1.5mmol/L α-萘胺标准液:精确称取α-萘胺214.8mg,置1000ml烧杯中加5ml无水乙醇溶解,然后加蒸馏水6O0ml,立即充分混匀,定量移入100Oml容量瓶中,加蒸馏水至刻度,混匀,置棕色瓶中,冰箱保存。2. 0.15mmol/L α-萘胺标准液,以1.5mmol/Lα-萘胺标准液用底物缓冲液作1:10稀释。按表进行操作:以上各管充分混合,放置10min,分光光度计波长530nm,比色杯光径1cm,一对照管调零,读取各个吸光度,以吸光度为纵轴,GGT(u/L)为横轴,作图,此即标准曲线。参考值:成年男性:3--17u/L成年女性:2--13u/L

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