实验四  细菌的接种培养法与生长现象的观察

【目的和要求】

1．掌握无菌技术，建立无菌观念；明确无菌操作时注意要点。

2．掌握细菌的接种、分离培养方法和接种环的制作方法。

3．熟悉细菌生长现象的观察方法。

【试剂与器材】

1．菌种：葡萄球菌、链球菌、大肠埃希菌、枯草芽胞杆菌等。

2．培养基：固体、半固体、液体培养基。

3．其他：温箱、酒精灯、接种环、接种针、L形玻棒、打火机、记号笔等。

【实验内容】

一、细菌的接种工具

1．接种环和接种针：其结构包括环（针）、金属柄、绝缘柄三部分（见图4-1）。其中环（针）部分最佳材料为白金丝，因其受热和散热速度快，硬度适宜，不易生锈且经久耐用，但因为价格昂贵而限制了其应用。目前实验室常用的是经济实用的300~500W电热镍鉻丝。一般要求接种环长5~8cm，直径为2~4mm，定量接种环的容量为0.001ml。

图4-1  接种环和接种针

   接种环（针）在使用之前需检查镍鉻丝是否呈直线，若有弯曲，需用吸管或接种环的另一端将其压直；若环不圆，可将镍鉻丝前端放在吸管尖部缠绕一圈，再将镍鉻丝突出的部分朝内压紧。

   接种环用于固体、液体培养基的接种，接种针用于半固体培养基的接种。

2．L形玻棒：由直径2~3mm的玻璃棒弯曲成L形制成。在使用之前用厚纸包扎后置高压蒸汽灭菌，或沾取无水乙醇后在火焰上烧灼灭菌。主要用于液体标本涂布接种。

二、细菌的接种方法

1．液体培养基的接种 

该法主要用于细菌的增菌培养或进行细菌的生化反应。

方法：（图4-2）

（1）先将接种环在火焰上烧灼灭菌，待冷却后挑取少许细菌。

（2）左手拿试管，右手持接种环，用右手其余手指将试管塞打开，试管口通过火焰烧灼灭菌。

（3）将接种环在贴近液面的管壁上上下碾磨数次，使细菌均匀分布于培养基中。

（4）将试管口灭菌后加塞，接种环烧灼灭菌后放回原处。

（5）在试管上做好标记，经35℃培养18~24h后观察结果。

图4-2  液体培养基接种法

2．半固体培养基的接种

该法可用于保存菌种、观察细菌的动力或进行细菌的生化反应。

方法：（图4-3）

（1）先将接种针在火焰上烧灼灭菌，待冷却后挑取少许菌落。

（2）左手拿试管，右手持接种针，将试管塞打开后，试管口通过火焰灭菌，将接种针从培养基的中心向下垂直穿刺接种至试管底上方约5mm处（勿穿至管底），然后由原穿刺线退出，

（3）将试管口灭菌后加塞，接种针烧灼灭菌后放回原处。

（4）在试管上做好标记，经35℃培养18~24h后观察结果。

图4-3  半固体培养基接种法

3．平板划线接种法

该法可将标本中的多种细菌分散成单个菌落，有利于细菌的分纯和进一步鉴定。

方法：

（1）连续划线法（图4-4）

1）先将接种环在火焰上烧灼灭菌，待冷却后挑取少许菌落。

2）左手斜持平板，用手掌托着平板底部，五指固定平板边缘，在酒精灯旁以拇指、食指和中指将平板盖撑开大约30~45°角，将已挑取细菌的接种环先在平板一侧边缘均匀涂布，然后运用腕力将接种环在平板上自上而下，来回划线。划线要密，但不能重叠，充分利用平板的面积，不能划破琼脂表面，并注意无菌操作，避免空气中的细菌污染。

3）划线完毕，将平板扣入平板盖，接种环烧灼灭菌后放回原处。

4）在平板底上做好标记，经35℃培养18~24h后观察结果。

图4-4  固体培养基连续划线法

（2）分区划线法（图4-5）

1）先将接种环在火焰上烧灼灭菌，待冷却后挑取少许菌落。

2）同上法将平板盖打开约30~45°角，将已挑取细菌的接种环在平板一端（1区）内作来回划线，再在2、3、4区依次划线，每区的划线须有数条线与上区交叉接触，每划完一区是否需要烧灼接种环依标本中的菌量多少而定，每区线间需保持一定距离，线条要密而不重复。

3）划线完毕，将平板扣入平板盖，接种环烧灼灭菌后放回原处。

4）在平板底上做好标记，经35℃培养18~24h后观察结果。

图4-5  固体培养基分区划线法

4．斜面培养基接种法（图4-6）

斜面培养基主要用于细菌的纯培养，以进一步鉴定细菌或保存菌种。

（1）将接种环（或接种针）在火焰上烧灼灭菌，待冷却后以无菌操作挑取少许菌落。

（2）左手拿试管，打开试管塞后，试管口通过火焰灭菌，再将取有细菌的接种环由斜面底部向上划一直线，再由下至上在斜面上作曲线划线。

（3）试管口灭菌后加塞，接种环烧灼灭菌后放回原处。

（4）在试管上做好标记，经35℃培养18~24h后观察结果。

图4-6 斜面培养基接种法

5．涂布接种法

本法主要用于活菌计数和药敏试验。

（1）活菌计数：取一定稀释度的菌液0.1ml滴在平板上，用无菌L型玻璃棒将液滴涂布均匀，盖上平板盖，经35℃培养18~24h后计数菌落，则每毫升所含活菌数=菌落数×10×稀释倍数。

（2）直接涂布法：多用于纸片法和管碟法药敏试验。先配制一定浓度的菌液，用无菌棉签蘸取菌液后，在管壁上将多余的液体挤去，在MH琼脂平板上按三个方向均匀涂布3次，最后沿平板边缘涂一周。盖上平板盖，置室温放置5min使平板表面稍干，然后用无菌镊子将药敏纸片贴在培养基表面，或向竖在平板表面的牛津小杯内加入不同浓度的药物，经35℃培养18~24h后观察结果，测定抑菌圈直径，按判断标准判定结果。

6．倾注培养法

此法常用于标本或样品中活菌计数。

（1）方法：

1）将标本用无菌生理盐水稀释成不同浓度：10-1、10-2、10-3、10-4、10-5等。

2）取不同稀释度的标本各1ml分别注入直径90mm无菌平皿，迅速加入溶化并冷却至约50℃的营养琼脂15ml，轻轻转动平板使之充分混匀，待凝固后翻转平板。

3）置35℃温箱孵育18~24h，计数菌落形成单位（colony forming unit，CFU），按下式算出每ml标本中的细菌数：

1ml标本中的活菌数=全平板CFU×稀释倍数

7．细菌接种的注意事项

（1）细菌接种过程中需注意无菌操作，避免污染，因此每一步操作均需严格按要求进行。操作时不宜说话或将口鼻靠近培养基表面，以免呼吸道排出的细菌污染培养基。

（2）所有操作均需在酒精灯火焰附近进行，平皿盖、试管塞、瓶塞均应拿在手上打开（具体见前述），禁止将盖或塞事先取下放置在桌面上。

（3）取菌种前灼烧接种针（环）时要将镍鉻丝烧红，烧红的接种针（环）稍事冷却再取菌种，以免烧死菌种。

（4）取菌时注意菌落不要取得太多，应蘸取而不宜刮取，否则平板划线很难分离出单个菌落。

（5）平板划线时注意掌握好划线的力度和角度，用力不能过重，接种环和培养基表面大约呈30~40°角，划线要密而不重复，充分利用培养基，并注意不能划破平板。半固体培养基接种时注意穿刺线要直，并沿原穿刺线退出。

（6）接种完毕后，需在培养基上做好标记再放置温箱孵育。废弃的有菌材料（如玻片、有菌的平板、试管、吸管等）均需灭菌后再清洗。发生有菌材料污染应及时进行消毒处理。

三、细菌的培养方法

1．需氧培养法

该法适用于需氧菌和兼性厌氧菌。将接种后的培养基（试管放试管架上，平板底上盖下）置35℃培养箱，培养18-24h。大多数细菌生长速度快，在孵育18~24h后即可见到生长现象，但若标本中的菌量少或生长速度慢的细菌（如结核分支杆菌），则需培养3~7天甚至4~8周后才能观察到生长现象。

2．CO2培养法

（1）CO2孵育箱：能自动调节箱内CO2的浓度和温度，使用方便。

（2）烛缸法：取一有盖磨口标本缸或玻璃干燥器，在盖及磨口处上涂上凡士林。将接种后的培养基放入缸中，并在缸内放一支点燃的蜡烛，加盖密封。随着缸内蜡烛燃烧产生的CO2增加，蜡烛逐渐自行熄灭，此时缸内的CO2浓度约为5~10%，置35℃培养箱孵育18~24h后观察结果。（见图4-7）

图4-7 烛缸法

（3）化学法（重碳酸钠-盐酸法）：按每升容积重碳酸钠0.4g与1mol/L盐酸0.35ml比例，分别将二种试剂置于容器内，将容器放置在标本缸中，密封后倾斜容器，使二种试剂接触混合产生CO2。该法适用于奈瑟菌和布鲁菌等苛养菌的培养。

3．微需氧培养：先用真空泵将容器内的空气排尽，再注入5%O2、10%CO2、85%N2的混合气体，然后置于35℃培养箱孵育后观察结果。该法适用于空肠弯曲菌、幽门螺杆菌等微需氧菌的分离培养。

4．厌氧培养法：

（1）厌氧罐培养法：用理化方法使容器内形成无氧环境，用于专性厌氧菌培养。常用的方法有抽气换气法和气体发生袋法。

1）抽气换气法：将已接种的培养基放入真空干燥缸或厌氧罐中，再放入催化剂钯粒和指示剂美蓝。先用真空泵将缸内抽成负压99.99kPa（750mmHg），再充入无氧氮气，反复三次，最后充入80%N2、10%H2和10%CO2混合气体，若缸内呈无氧状态，则指示剂美蓝为无色。每次观察标本后需重新抽气换气，用过的钯粒经160℃2h干烤后可重复使用。

2）气体发生袋法（Gas-pak法）：该法需以下二种容器：厌氧罐——是由透明聚碳酸酯或不锈钢制成，盖内有金属网状容器，其内装有厌氧指示剂美蓝和用铝箔包裹的催化剂钯粒；气体发生袋——是一种铝箔袋，其内装有硼氢化钠-氯化钴合剂、碳酸氢钠-柠檬酸合剂各1丸和1张滤纸条，使用时剪去特定部位，注入10ml水，水沿滤纸渗入到二种试剂中，发生下列化学反应，产生H2和CO2。立即将气体发生袋放入罐内，密封罐盖，使气体释放到罐中。

C6H8O7+3NaHCO3→Na3(C6H5O7)+3H2O+3CO2↑

NaBH4+2H2O→NaBO2+4H2↑

（2）厌氧袋法：厌氧袋是用无毒透明、不透气的复合塑料薄膜制成。袋中装有催化剂钯粒和2支安瓿，分别装有H2、CO2发生器（化学药品，成分同上）、指示剂美蓝。使用时将接种细菌的平板放入袋中，密封袋口，先将袋中装有化学药品的安瓿折断，几分钟后再折断装有美蓝的安瓿，若美蓝为无色则表示袋内已处于无氧状态，置35℃温箱孵育。

（3）需氧菌共生法：将已知专性需氧菌（如枯草芽胞杆菌）和待检厌氧菌分别接种到2个大小相同的平板上，将两者合拢，缝隙用透明胶密封，置35℃温箱培养，需氧菌生长过程中消耗氧气，待氧气耗尽后，厌氧菌即开始生长。

（4）平皿焦性没食子酸法：按每100ml容积加入焦性没食子酸1g和2.5mol/LNaOH 10ml（也可用Na2CO3）的比例，先将焦性没食子酸放入平皿盖背面的灭菌纱布中，再滴入NaOH，立即将接种细菌的平板扣上，用熔化的石蜡密封平皿和平皿盖的缝隙，置35℃温箱培养。

（5）庖肉培养基法：将庖肉培养基上面的石蜡熔化，用毛细管吸取标本后接种于培养基中，待石蜡凝固后置37℃孵育。用于培养基中的肉渣可吸收氧气，石蜡凝固后起隔绝空气的作用，从而使培养基内呈无氧状态。

（6）厌氧手套箱培养法：厌氧手套箱是目前国际上公认的培养厌氧菌最佳仪器之一。它是一个密闭的大型金属箱，箱的前面有一个透明面板，板上装有两个手套，可通过手套在箱内进行操作。箱侧有一交换室，具有内外二门，内门通箱内先关着。使用时将物品放入箱内，先打开外门，放入交换室，关上外门进行抽气、换气（H2，CO2，N2）使之达到厌氧状态，然后手伸入手套把交换室内门打开，将物品移入箱内，关上内门。箱内保持厌氧状态，是利用充气中的氢在钯的催化下和箱中残余氧化合成水的原理。该箱可调节温度，本身是孵箱或将孵箱附在其内。该法适于作厌氧菌的大量培养研究。

四、细菌生长现象的观察

1．液体培养基中的生长现象：

浑浊生长（如葡萄球菌）、沉淀生长（如链球菌）、菌膜生长（如枯草杆菌）。

观察要点：注意观察培养基的透明度、管底和液面上是否有细菌生长。

2．半固体培养基中的生长现象：

（1）无鞭毛的细菌：仅沿穿刺线生长，穿刺线清晰，周围培养基透明（如葡萄球菌）。

（2）有鞭毛的细菌：沿穿刺线向四周扩散生长，穿刺线边缘呈羽毛状，周围培养基变浑浊（如大肠埃希菌）。

观察要点：注意观察穿刺线是否清晰、周围的培养基是否混浊。

3．固体培养基中的生长现象：

菌落：由一个细菌生长繁殖而形成的一个肉眼可见的细菌集团。因来源相同，同一个菌落的细菌为纯种细菌。不同细菌菌落的形态学特征不同，可以鉴别细菌。

菌苔：由多个菌落融合而成，可能含有杂菌。

菌落性状的描述：大小、形状、颜色、凸扁、表面光滑度、湿润度、光泽、透明度、边缘、粘度、溶血（血平板）、气味等。

【结果记录和报告

实验九 细菌的生化鉴定

一、 实验目的

1、了解细菌生理生化反应原理，掌握细菌鉴定中常用的生理生化反应的测定方法；

2、掌握糖发酵试验、淀粉实验、吲哚实验、M.R.及V. P的原理、方法及相应培养基的制备方法。

3、了解细菌在培养基中的生长现象及其代谢产物在鉴别细菌中的意义；

4、掌握以上实验的用途。

二、实验原理

各种微生物在代谢类型上表现了很大的差异。由于细菌特有的单细胞原核生物特性，这种差异就表现得更加明显。不同细菌具有不同的酶系统，故不同细菌分解、利用糖类、脂肪类和蛋白类物质的能力不同，它们对物质的代谢谱和分解产物也就不同，细菌的这种代谢特点可供鉴别细菌之用。用生理生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物，从而鉴别细菌的种属，称之为细菌的生理生化反应，其在菌株的分类鉴定中具有主要意义。

1、糖发酵实验

不同的细菌含有发酵不同糖（醇）的酶，因而发酵糖（醇）的能力各不相同。其产生的代谢产物亦不相同，如有的产酸产气，有的产酸不产气。酸的产生可利用指示剂来判定。在配制培养基时预先加

入溟甲酚紫［P HS . 2 （黄色）一6 . 8 （紫色）] ，当发酵产酸时，可使培养基由紫色变为黄色。气体产生可由发酵管中倒置的杜氏小管中有无气泡来证明。发酵后产生的有机酸： 乳酸、醋酸、丙酸等 （溴甲酚紫变色范围pH5.2~6.8, pH6.8紫色） ；发酵后产生的气体： 甲烷、氢、二氧化碳等（杜氏小管内有气泡，产气漂浮）。

2、M.R.及V.P实验

很多细菌，如大肠杆菌等分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸再被分解，产生甲酸、乙酸、乳酸等，使培养基的pH 降低到4 . 2 以下，这时若加甲基红指示剂呈现红色。因甲基红指示剂变色范围是pH4 . 4 （红色）-pH6 . 2 （黄色）。若某些细菌如产气杆菌，分解葡萄糖产生丙酮酸，但很快将丙酮酸脱梭，转化成醇等物，则培养基的pH 仍在6 . 2 以上，故此时加入甲基红指示剂，呈现黄色。甲基红试验是用来检测由葡萄糖产生的有机酸，如甲酸、乙酸、乳酸等。当细菌代谢糖产生酸时，培养基就会变酸，使加入培养基的甲基红指示剂由橘黄色变为红色。VP试验是用来测定某些细菌利用葡萄糖产生非酸性或中性末端产物的能力，如丙酮酸。丙酮酸经缩合、脱羧后生成乙酰甲基甲醇，此化合物在碱性条件下能被空气中的氧气氧化成二乙酰。二乙酰与蛋白胨中精氨酸的胍基作用，生成红色化合物。

3、吲哚实验

吲哚试验是用来检测吲哚的产生。有些细菌能产生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨酸产生吲哚和丙酮酸。吲哚与对二甲基氨基苯甲醛结合，形成红色的玫瑰吲哚。

4、淀粉水解实验

微生物对大分子的淀粉、蛋白质和脂肪不能直接利用，必须靠产生的胞外酶将大分子物质分解成小分子物质才能被微生物吸收利用。胞外酶主要是水解酶，通过加水裂解大分子物质为较小的化合物，使其能被运输到细胞内。如淀粉酶水解淀粉为小分子的糊精、双糖和单糖；脂肪酶水解脂肪为甘油和脂肪酸；蛋白酶水解蛋白质为氨基酸等。这些过程可以通过观察细菌菌落周围物质的变化来证实。如可以用滴加碘液到菌落周围看是否变蓝色来检查是否产生淀粉酶。脂肪水解后产生脂肪酸会使培养基pH下降，可以在培养基中事先加入中性红试剂，培养基会从淡红色变为深红色。

5、触酶实验

触酶又称过氧化氢酶，具有过氧化氢酶的细菌，能催化过氧化氢成为水和原子态氧，继而形成氧分子，出现气泡。大多需氧和兼性厌氧菌均产生过氧化氢酶，但链球菌科阴性，故常用此试验来鉴定。

6、三糖铁实验（硫化氢产生实验）

某些细菌能分解含硫的氨基酸(胱氨酸、半胱氨酸等)，产生硫化氢，硫化氢与培养基中的铁盐反应，形成黑色的硫化铁沉淀，为硫化氢试验阳性。细菌能发酵乳糖和蔗糖产酸或产酸产气（变黄）。

三、实验仪器、材料和用具

1、实验仪器：37℃恒温培养箱。

2、微生物材料：大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的菌种平板各1个。

3、试剂：40％NaOH溶液、乙醚、甲基红试剂、50g/L α－萘酚(95％

乙醇溶液)、30%双氧水和1%溴麝香草酚蓝酒精液。

4、用具：接种环、酒精灯、镊子、试管和杜氏小套管

5、培养基及其配方：葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基（葡萄糖和山梨醇）和三糖铁培养基。

（1）淀粉培养基100ml（分装于四个三角瓶，包扎，121~126℃灭菌20min）：蛋白胨，2g ；可溶性淀粉，0.4g；氯化钠，1g ；琼脂，3~4g；酵母提取物，1g；加单蒸水定容至100ml ，调整pH 为7.2。

（2）糖发酵培养基：100ml（分装于试管，包扎，105℃灭菌20min）：蛋白胨2g; 氯化钠，1g； 葡萄糖， 1g； 加单蒸水定容100ml；pH调整为为7.4。溴甲酚紫溶液（1.6%水溶液）1ml

（3）M.R.及V.P实验培养基（葡萄糖胰蛋白胨水培养基）：100ml（分装于试管，包扎，105℃灭菌20min）：蛋白胨0.5g; K2HPO4 ，0.5g；葡萄糖，0.5g； 加单蒸水定容100ml；pH调整为为7.4。

甲基红指示剂：0.1g甲基红溶于300ml 95％酒精中，再加入蒸馏水200ml。

（4）吲哚培养基（胰蛋白胨水培养基）：100ml（分装于试管，包扎，105℃灭菌20min）

蛋白胨1g； 氯化钠，0.5g；加单蒸水定容100ml。

（5）三糖铁琼脂培养基（成品）：按培养基配方加。

具体配方（实验报告可以不抄）：蛋白胨 20.0g；牛肉膏 3.0g；乳 糖 10.0g；蔗 糖 10.0g；葡萄糖 1.0g ；硫酸亚铁铵(含6个结晶水) 0.5g；酚 红 0.025g或5g/L溶液5mL；氯化钠5.0g ；硫代硫酸钠

0.5g；琼 脂 12.0g；蒸馏水 1000.0mL

除酚红和琼脂外，将其他成分加入400mL蒸馏水中，搅拌均匀，静置约10min，加热煮沸至完全溶解，调至pH7.4±0.1。另将琼脂加入600mL蒸馏水中，搅拌均匀，静置10min，加热煮沸至完全溶解。 将上述两溶液混合均匀后，再加入酚红指示剂，混匀，分装试管(12mm×100mm)，每管约2～4mL，高压灭菌105℃ 20min，灭菌后置成高层斜面，呈桔红色。

四、实验原理与步骤

1. 糖发酵实验

① 试管标记：取分别装有不同糖类（如葡萄糖、蔗糖和乳糖等）发酵培养液的试管，根据需要培养的细菌做好标记（如大肠埃希菌、产气肠杆菌、普通变形菌等和空白对照）。

② 接种培养：以无菌操作分别接种少量菌苔至以上各相应试管中，空白对照中不接种，置37℃恒温箱中培养，分别在培养24h、48h和72h观察结果。

③ 观察记录：培养后各发酵管与空白对照相比，若接种培养液保持原有颜色，其反应结果为阴性，表明该菌不能利用该种糖，记录用“－”表示；如培养液呈黄色，反应结果为阳性，表明该菌能分解该种糖产酸，记录用“＋”表示。培养液中的杜氏小管内有气泡为阳性反应，表明该菌分解糖能产酸并产气，记录用“＋”表示；如杜氏小管内没有气泡为阴性反应，记录用“－”表示。

2. V.P.试验

① 标记试管：取装有葡萄糖蛋白胨培养液的试管，根据需要将培养的细菌做好标记。

② 接种培养：以无菌操作分别接种少量菌苔至以上相应试管中，空白对照管不接种，置37℃恒温箱中，培养24～48h。

③ 观察记录：取出以上试管，振荡2min。另取2支空试管相应标记菌名，分别加入2ml以上对应管中的培养液，加入50g/L α－萘酚(95％乙醇溶液)1ml，再加入40％NaOH0.4毫升，摇振混合，置37℃恒温箱中保温30min。试验时强阳性者约于5分钟后，可产生粉红色反应（长时间无反应，置室温过夜），次日不变者为阴性。若培养液呈红色，记录为V.P.试验阳性反应（用“＋”表示）；若不呈红色，记录为V.P.试验阴性反应（用“－”表示）。

注：原试管中留下的培养液用作甲基红试验。

3. 甲基红试验（M.R.试验）

取装有葡萄糖蛋白胨水培养液的试管，接种需培养鉴定的细菌，经过夜培养后，加入2～3滴甲基红指示剂，注意沿管壁加入，仔细观察培养液上层，若培养液上层变成红色，即为阳性反应；若仍呈黄色，则为阴性反应，分别用“＋”或“－”表示。

4. 吲哚试验

① 试管标记：取装有蛋白胨水培养液的试管，根据需要培养的细菌做好标记。

② 接种培养：以无菌操作分别接种少量菌苔到以上相应试管中，第5管作空白对照不接种，置37℃恒温箱中培养24～48h。

③ 观察记录 ：加入1ml乙醚（作用是萃取出吲哚），震荡，静止片刻使分层，沿管壁再在培养液中慢慢加入10滴吲哚试剂，使试剂浮于培养物表面，形成两层，观察结果：如有吲哚存在，乙醚层呈现玫瑰红色，此为吲哚试验阳性反应，否则为阴性反应，阳性用“＋”、阴性用“－”表示。

5、淀粉水解实验

把淀粉平板培养基平均分成3部分，分别接上提供的2种菌，留一区作为对照。置37℃培养箱内培养24h。将平皿取出，打开皿盖，加少量碘液于平板上，轻轻摇动平皿，使碘液均匀铺满整个平板。若菌苔周围有无色透明圈出现，说明淀粉已经被水解。透明圈的大小，说明该菌水解淀粉能力的大小。

6、触酶实验

取培养好的细菌于玻片上，然后滴加3%的双氧水数滴，观察结果。 若立即出现大量气泡为阳性。无气泡为阴性。若有气泡产生，则说明该细菌具有过氧化氢酶。

注意：3%的双氧水现用现配。

7、三糖铁实验

以接种针挑取待试菌可疑菌落或纯培养物，穿刺接种并涂布于斜面，置36±1℃培养18~24h，观察结果。该培养基含有乳糖、蔗糖和葡萄糖的比例为10:10:1，只能利用葡萄糖的细菌，葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸，因接触空气而氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱性产物，故使斜面后来又变

红，底部由于是在厌氧状态下，酸类不被氧化，所以仍保持黄色。而发酵乳糖的细菌(e.coli)，则产生大量的酸，使整个培养基呈现黄色。如培养基接种后产生黑色沉淀，是因为某些细菌能分解含硫氨基酸(胱氨酸、半胱氨酸等)，生成硫化氢，硫化氢和培养基中的铁盐反应，生成黑色的硫化亚铁沉淀。

五、实验结果与分析

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初中生物实验操作学生用检测不同环境中的细菌和真菌探究班级组别姓名日期目的要求1尝试细菌真菌的采样接种和一般培养方法2认识细菌和真菌的菌落材料用具装有牛肉汁培养基的培养皿已经高温灭菌无菌棉棒透明胶带标签纸放大镜实...

实验四细菌的接种培养和分离技术一实验目的与要求1掌握从环境土壤水体活性污泥等中分离培养细菌的方法从而获得若干种细菌纯培养技能2掌握细菌纯种分离的方法稀释平板分离法和平板划线法3掌握几种接种技术斜面接种技术穿刺接...

小鼠星形胶质细胞原代培养及分离纯化实验方案经过相关文献阅读参考了众多对于小胶质细胞培养方案对比了不同方案的利弊优缺整合了相对符合本实验室条件和实验要求的方法如有其他变更方案以修改后为准1实验材料与试剂剪刀小镊子...

实验目的1了解原代细胞培养的基本方法及操作过程2学习细胞计数营养液的配制等初步掌握无菌操作方法3了解细胞损伤的过程及死活细胞的鉴定方法实验原理一细胞原代培养原代细胞培养是指直接从动物体内获取的细胞组织和器官经体...

生物化学实验报告培养细胞之死活细胞的鉴别112一实验目的11学习并掌握动物细胞培养的无菌操作技术12了解并掌握用组织块贴壁培养法和消化细胞培养法进行动物细胞原代培养的实验方法13熟练掌握动物细胞传代培养的实验方...

细菌的培养实验报告（11篇）