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称量、熔胶、倒胶、拔梳。1.称量我们通常所说的0.8%、1%的胶都是指的质量体积分数,即所称取的琼脂糖粉的质量(g)比所加的TBE缓冲液的体积(mL)即胶的浓度。缓冲液的体积根据胶板的大小而定。如小胶板0.8%的胶需要琼脂粉0.104g,TBE13ML。2.熔胶将所称量的琼脂粉与TBE在锥形瓶中混合,在微波炉内反复加热2~3次至琼脂粉溶解并无气泡。3.倒胶干净的胶槽内摆好梳子,往胶内滴加1uL左右核酸染料,混匀,待冷却至不烫手,轻轻倒入胶板内。4.拔梳.待大约20min后,轻轻拔掉梳子(若不好拔,可以滴加适量的TBE缓冲液)。 琼脂糖凝胶是依靠糖链之间的次级链如氢键来维持网状结构,网状结构的疏密依靠琼脂糖的浓度。一般情况下,它的结构是稳定的,可以在许多条件下使用(如水,pH4-9范围内的盐溶液)。琼脂糖凝胶在40℃以上开始融化,也不能高压消毒,可用化学灭菌活处理。 |
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