本文使用悟空K2025高效液相色谱仪测定西洋参中人参皂苷Rg1、Re、Rb1的含量。其连续进样7针的峰面积的重复性完全满足2020年版《中国药典》的要求。

二、背景

西洋参具有补气养阴，清热生津。用于气虛阴亏，虛热烦倦，咳喘痰血，内热消渴，口燥咽干。西洋参为市场上较为常见的名贵药材，其主要的活性成分为皂苷类，如人参皂苷Re、人参皂苷Rb1等。在2020年版《中国药典》中规定了利用高效液相色谱法测定西洋参中人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1的含量以控制药物的质量。

三、实验过程

1 范围

适用于西洋参中人参皂苷Rg1、Re、Rb1的测定。

2 原理

人参皂苷Rg1、Re、Rb1易溶于甲醇，在203nm处有紫外吸收，使用高效液相色谱法进行检测，外标法定量。

3 试剂与材料

3.1 水：符合GB/T6682的一级水；

3.2 乙腈：色谱纯；

3.3 磷酸：优级纯；

3.4 0.1%磷酸水溶液：吸取1mL磷酸用一级水定容至1L，过0.22μm滤膜。

4 仪器与设备

4.1 高效液相色谱仪：K2025 P2二元高压梯度输液泵、K2025 AS自动进样器、K2025 CO柱温箱、K2025 UVD紫外-可见光检测器；Wookinglab色谱工作站

5 测定步骤

5.1样品前处理

对照品溶液制备：取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Re对照品、人参皂苷Rb1对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL各含人参皂苷Rg1 0.1mg、人参皂苷Re 0.4mg、人参皂苷Rb1 1mg的溶液，即得。

供试品溶液制备：取本品粉末（过三号筛）约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入水饱和的正丁醇50mL，称定重量，置水浴中加热回流提取1.5小时，放冷，再称定重量，用水饱和正丁醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液25mL，置蒸发皿中，蒸干，残渣加50%甲醇适量使溶解，转移至10mL量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

5.2 色谱条件：

a）色谱柱：C18 4.6×250mm，5μm；

b）流动相：A：乙腈；B：0.1%磷酸水溶液；

c）柱温：40℃；

d）进样量：10μL；

e）流速：1mL/min；

f）波长：203nm；

h）梯度洗脱程序见表1：

表1 梯度洗脱程序

时间/min

A%（乙腈）

B%（0.1%磷酸水溶液）

0

19

81

25

20

80

60

40

60

90

55

45

100

60

40

110

19

81

120

19

81

6 色谱图及重复性结果

对照品参考色谱图如图1

图1. 对照品参考色谱图

对照品进样7针的色谱图叠加图如图2

图2. 进样7针对照品色谱图的叠加图

表2 进样7针对照品重复性计算结果

峰1 Rg1

对照品1

对照品2

对照品3

对照品4

对照品5

对照品6

对照品7

平均值

SD

RSD%

保留时间

33.760

33.818

33.675

33.755

33.685

33.747

33.675

33.731

0.054

0.161

峰面积

406.775

406.708

409.409

410.531

407.131

407.826

410.157

408.362

1.637

0.401

峰2 Re

对照品1

对照品2

对照品3

对照品4

对照品5

对照品6

对照品7

平均值

SD

RSD%

保留时间

34.550

34.602

34.470

34.542

34.482

34.532

34.472

34.521

0.049

0.142

峰面积

1203.446

1205.585

1212.382

1214.792

1204.29

1206.646

1213.277

1208.631

4.700

0.389

峰3 Rb1

对照品1

对照品2

对照品3

对照品4

对照品5

对照品6

对照品7

平均值

SD

RSD%

保留时间

54.850

54.860

54.808

54.873

54.813

54.84

54.833

54.840

0.024

0.043

峰面积

2855.097

2858.418

2876.438

2878.897

2856.686

2860.233

2877.542

2866.187

10.837

0.378

供试品参考色谱图如图3

图3 供试品参考色谱图

进样7针供试品色谱图叠加图如图4

图4 进样7针供试品色谱图叠加图

表3 进样7针供试品重复性计算结果

峰1 Rg1

供试品1

供试品2

供试品3

供试品4

供试品5

供试品6

供试品7

平均值

SD

RSD%

保留时间

33.755

33.69

33.705

33.785

33.745

33.788

33.837

33.758

0.051

0.150

峰面积

131.802

131.307

131.923

132.136

132.972

132.87

132.272

132.183

0.589

0.446

峰2 Re

供试品1

供试品2

供试品3

供试品4

供试品5

供试品6

供试品7

平均值

SD

RSD%

保留时间

34.548

34.487

34.5

34.57

34.535

34.587

34.622

34.550

0.048

0.138

峰面积

1909.479

1914.707

1910.289

1912.251

1915.361

1918.142

1917.844

1914.010

3.453

0.180

峰3 Rb1

供试品1

供试品2

供试品3

供试品4

供试品5

供试品6

供试品7

平均值

SD

RSD%

保留时间

54.923

54.895

54.87

54.895

54.87

54.918

54.907

54.897

0.021

0.039

峰面积

4592.244

4604.912

4600.139

4605.279

4614.771

4623.34

4625.138

4609.403

12.166

0.264

7 结论

采用悟空仪器 K2025高效液相色谱仪对西洋参中的人参皂苷Rb1、Rg1、Re进行测定，实验结果表明，在连续梯度洗脱条件下，连续进样7针对照品及供试品Rg1、Re、Rb1保留时间RSD均小于0.20%；连续进样7针对照品及供试品Rg1、Re、Rb1峰面积RSD均小于0.50%，满足药典小于2.0%的要求。因此，使用悟空仪器 K2025的高效液相色谱仪测定西洋参中的人参皂苷Rb1、Rg1、Re有良好的重复性。