作者 | 李学勤 李宜珂

单位 | 山西白求恩医院检验科

免疫固定电泳简介

免疫固定电泳是血清区带电泳与免疫沉淀反应相结合的定性实验，属于Ig鉴别的一种方法。它将抗血清直接加在电泳后的蛋白质表面，抗原抗体在凝胶中直接发生沉淀反应，然后在适当位置形成抗原抗体复合物，经染色后可以对各类免疫球蛋白及其轻链进行分型。

免疫固定电泳的高分辨率及抗原抗体反应的高特异性，为蛋白质的研究提供了新的平台，主要用于单克隆免疫球蛋白病的诊断，尤其是对浆细胞疾病的诊断和鉴别诊断意义重大。

单克隆免疫球蛋白病和多克隆免疫球蛋白病的鉴别是十分必要的，因为多克隆免疫球蛋白病多是一些临床综合征的继发病如慢性肝病、胶原病、类风湿关节炎和慢性感染等。

病例回顾

近日，我们在日常工作中发现了一例多发性骨髓瘤的患者，其血清免疫固定电泳结果如图1:

图1 A原始结果，B复查结果

该患者同时出现了IgGκ和IgAκ阳性，但是历史结果为IgAκ阳性，复查后结果一致。难道是该患者出现了Ig类型的转变？

有文献曾报道多发性骨髓瘤患者经治疗后M蛋白由IgA型重链改变为IgG型，原因可能为:移植后的反应性改变；体内存在其他Ig类型的易感基因，治疗后该易感基因表达导致Ig类型的转变；患者体内存在不同的Ig通路，治疗后之前的Ig通路被抑制，新的Ig通路被激活。

还有一种可能就是该患者还是IgAκ阳性，只是电泳结果被其他因素干扰，但是是什么影响了其免疫固定电泳的结果呢？

于是我们查阅了该患者的病历：患者老年女性，诊断多发性骨髓瘤（IgAκ型，DS分期ⅢA期，ISS分期Ⅱ期）7月余，2020年8月8日、9月12日、10月11日予VD方案化疗，于10月下旬无明显诱因出现胸痛，2020年11月通过PET-CT发现全身多发骨质密度异常病灶，提示疾病进展，予Dara+VRD（Dara800mg qw, 硼替佐米2mgqw, 来那度胺5mgd1-21,地塞米松）方案化疗。

首次Dara输注1小时后出现寒战高热，对症处理后好转，后续输注未再出现。2020年12月30日行第2疗程Dara+VRD，现为进一步评估疗效及治疗入院。看到这里恍然大悟，那就是Dara这个药物在“捣鬼”！

Dara药物简介：

中文名：达雷妥尤单抗，英文名：Daratumumab（DARA，商品名：Darzalex）。达雷妥尤单抗是一种人源化的抗CD38IgGκ单克隆抗体，具有广谱的杀伤活性。

CD38是一种跨膜糖蛋白，在多发性骨髓瘤细胞表面高度一致地表达。2008年Daratumumab首次作为CD38单抗被注射入多发性骨髓瘤患者。

Daratumumab与肿瘤细胞表面的CD38分子结合后，通过FcγRs介导诱发细胞凋亡，同时能够通过补体依赖的细胞毒性反应（CDC）、抗体依赖性细胞介导的细胞毒性作用（ADCC）、抗体依赖性细胞吞噬作用（ADCP）等多种免疫机制诱导肿瘤细胞的快速死亡，而对CD38低表达的NK细胞、T细胞等正常免疫细胞伤害性很低，且DARA联合硼替佐米或来那度胺治疗具有明显的协调作用。

目前用于难治/复发多发性骨髓瘤患者的治疗正处于2期和3期临床试验，其临床价值没有得到全面评价。

图2 DARA治疗多发性骨髓瘤的作用机制

病例讨论

我们回到上文的病例中，该患者血清中IgG的含量降低，IgA含量相对增高，最终报告为IgAκ阳性，而IgG和κ泳道上的致密条带是其服用药物DARA所导致的假阳性。

免疫固定电泳中免疫固定的单克隆条带的迁移位置应该和参考蛋白条带保持一致，但是本患者电泳结果IgGκ对应的参考蛋白在γ区对应的参考蛋白条带比较弱，我们考虑可能与SP泳道上蛋白固定剂的低特异性有关系。

同时IgAκ没有出现明显的对应条带，原因可能为IgA型免疫球蛋白在人体中含量降低，且因其多态性形成的二聚体和三聚体导致蛋白质不同的迁移率，因此IgA型较其他类型的单克隆条带宽而弥散，不易判读。

另外IgA型免疫球蛋白常隐藏在β区的多克隆免疫球蛋白中，再加上蛋白固定剂的低特异性，在血清蛋白电泳以及固定电泳的SP泳道中，易出现假阴性，这一点应该引起我们检验人员的广泛关注。

同样地，其他免疫固定电泳检验结果的常见问题，我们也应该能够给出合理的解释：

当患者样本中有过量的免疫球蛋白，导致抗原抗体不等价，免疫沉淀溶解体现在最高浓度处的蛋白流失，这直接导致仅条带的边缘处被染色，中心没有染色的区域，即“口型”，此时应对样本进行更高程度的稀释；

如果M蛋白浓度太低，免疫固定的条带可能会隐匿在多克隆球蛋白的染色背景中，无法判读是否为多克隆免疫球蛋白疾病；

血清免疫固定电泳只有轻链成分时，应进一步进行IgD和IgE固定电泳来判断是否为轻链型M蛋白；

若出现与原始条带不同的条带，应注意鉴别有无药物的干扰；

IgM是以五聚体的形式存在，大量的IgM会导致凝胶孔的堵塞，使得每个泳道在点样孔的位置都出现染色程度相同的条带；

血浆标本可能会导致γ区出现一条纤维蛋白原带。

病例追踪

2021年2月该患者已使用了3个疗程的DARA+VRD方案化疗，再次入院巩固治疗，并送检血清样本免疫固定电泳，结果如下：

图3 再次入院免疫固定电泳结果

可以发现该患者治疗取得了明显效果，电泳结果显示IgA型免疫球蛋白已经消失，只有DARA药物导致的IgGκ假阳性。

此次入院予患者第4疗程DARA+VRD方案化疗，患者一般状况良好，2日后予以出院。两周后该患者门诊随诊，留取血清样本，免疫固定结果完全阴性。这些再次验证了该患者的首次电泳结果为DARA药物导致的IgGκ假阳性。

结 论

我们在日常工作中，针对DARA药物治疗的多发性骨髓瘤患者，如果血清蛋白电泳的慢γ区出现条带，检验人员要意识到这可能是DARA药物所导致；同时判读免疫固定电泳的结果要结合患者的临床情况，合理分析各种异常情况的出现，避免假阴性和假阳性的出现，为临床诊断提供及时正确的帮助。

【参考文献】

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编辑：徐少卿 审校：陈雪礼