*并非所有浓度的预制胶都提供每种上样孔规格

NuPAGE Bis-Tris 和 Bolt Bis-Tris Plus 预制胶的中性 pH 缓冲液可提供清晰笔直的条带。电泳分离过程中，这类预制胶的工作 pH 值接近 7。而在 Laemmli 系统（Tris-甘氨酸）中，凝胶在碱性 pH 值（pH 约 9.5）下运行。在高 pH 值下，残留的未聚合丙烯酰胺可与待分离蛋白质的半胱氨酸和赖氨酸残基反应。这可能会影响下游分析，例如蛋白质印迹转印。在 NuPAGE Bis-Tris 和 Bolt Bis-Tris 预制胶的中性 pH 值下，这些反应比在 Tris-甘氨酸预制胶的碱性 pH 值下慢几个数量级，从而能获得更清晰锐利的条带和更高的分辨率。

NuPAGE Bis-Tris 预制胶和传统 tris-甘氨酸预制胶的蛋白质分离效果比较。下面列出的样品在（A）Invitrogen NuPAGE MES SDS 电泳缓冲液中的 NuPAGE 4–12％ Bis-Tris 凝胶体系上运行，或（B）在另一家制造商的 4–20％ tris-甘氨酸凝胶体系上运行。请注意 NuPAGE 蛋白预制胶中样品条带的分辨率更高。在另一制造商的凝胶中则观察到分辨不清的“模糊”条带，这是样品中某些二硫键重新氧化的结果，从而导致迁移率发生轻微变化。泳道1、6、7、10：Invitrogen Mark12 非预染蛋白质分子量标准；泳道 2：高蛋白上样量（4 个蛋白质，6 µg/蛋白）；泳道 3：宽范围分子量标准；泳道 4、5：大肠杆菌提取物；泳道 8：E-PAGE SeeBlue 预染蛋白质分子量标准；泳道 9：Invitrogen MultiMark 多色蛋白质分子量标准。

样品前处理是成功进行蛋白质分析的关键步骤。在 100°C 下加热时，传统 Laemmli 型上样缓冲液的 pH 值从 6.8 变为 5.2。 已知较低的 pH 值可诱导天冬氨酰-脯氨酰（Asp-Pro）肽键裂解，从而导致蛋白质降解。通过维护 >7.0 的 pH 环境，InvitrogenNuPAGE LDS 上样缓冲液 和 Bolt LDS 上样缓冲液通过最小化 Asp-Pro 裂解来保持蛋白质完整性。如下所示，在整个电泳过程中，使用 Invitrogen NuPAGE 体系可保持样品完整性；用 Laemmli（Tris-甘氨酸）上样缓冲液制备的样品中可见蛋白质降解。Invitrogen NuPAGE 抗氧化剂电泳缓冲液添加剂可在电泳过程中最大程度地减少蛋白质氧化，并保持还原型蛋白条带清晰锐利。

出色的样本完整性。与使用 Laemmli（tris-甘氨酸）样品缓冲液（右）制备的样品相比，使用 NuPAGE Bis-Tris 预制胶体系（左）可在整个电泳过程中保持样品的完整性。

每个 Bolt 预制胶上独特的楔形上样孔可提供更高的上样量，因此您可以在每个孔中加入多达两倍的蛋白质样品。

即使在稀释样品中也可以检测蛋白质，或者测量低丰度蛋白质的表达。有了更多的上样空间，您不再需要担心样品溢出和蛋白质印迹上的孔间污染。无需使用特殊的凝胶上样枪头，上样操作也更加容易。

Bolt Bis-Tris Plus 预制胶的高样品容量。(A) 在 Invitrogen Bolt 4–12% Bis-Tris Plus 10泳道中，间隔加入体积逐渐增加的荧光蛋白标准品（40 μL–70 μL）。(B) 在 Bio-Rad 的 4–20% 10 孔预制胶的泳道中，间隔加入相同的蛋白标准品（10 μL–40 μL）。可在空白泳道中观察到来自相邻孔中样品的信号，即样品溢出导致的孔间污染。