1.要先用不带同源臂的引物克隆出目的片段后再用带同源臂的引物进行第二次克隆胶回收吗？

2.可以直接带有同源臂的引物克隆目的片段吗？

3.带同源臂的引物无法扩增出目的条带怎么办？

4.片段克隆后胶回收的问题？

1.为什么提取出来的质粒浓度很低？如何解决

2.摇菌一般摇多久？

3.为什么提取出来的质粒浓度高，但是电泳出来的条带很暗甚至没有？

4.通过内切酶进行单酶切的质粒，出现的条带与不进行酶切的质粒的条带位置一模一样，这是为什么？

5.单酶切的质粒为什么不止有一条条带？

6.酶切后的质粒需不需要进行胶回收？酶切后的质粒进行胶回收后浓度特别低，怎么办？

7.TA克隆or同源重组？

1.感受态的大肠杆菌的有效期？

2.为什么经过转化后的大肠杆菌在抗性板上长不出菌？

3.为什么经过转化后的大肠杆菌在抗性板上长出很密集的菌点甚至是一层厚厚的菌膜？

​4.在转化大肠杆菌的过程中，如果调错了热激的温度，但是逗留的时间很短，重新校正后，还可以直接用来转化，可以成功吗？

5.卡那霉素抗性板和氨苄青霉素抗性板有什么区别？

6.为什么抗性板上会长出卫星菌落？

1.挑的菌但是摇不起来是什么原因？

2.挑的菌能摇起来但是菌落PCR后没有条带，为什么？

3.挑的菌能摇出来，菌落PCR的条带与目的条带不符合是什么原因？

4.挑的菌能摇起来，菌落PCR的条带不止一条是什么原因？

5.为什么阴性对照的菌落PCR也能扩增出条带？

6.交叉引物和通用引物，用哪个？

1.挑的菌能摇出来，菌落PCR的条带符合目的条带，但是菌液测序失败是什么原因？

2.菌液测序显示信号弱是什么原因，能测得出来吗？如果测出来的序列是成功的，菌液能不能用？

3.菌液测序说的测通是什么意思，正向、反向、双向？

4.测序结果中发现有一些缺失、插入、转换等突变，这算是成功了吗？

5.成功的菌液如何保存？

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