免疫沉淀（IP）和免疫共沉淀（Co-IP）是纯化富集目的蛋白和确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。以抗体和抗原之间的专一性作用为基础，是天然构象状态的抗原（蛋白样品）和抗体之间的反应。免疫沉淀的成功依赖于抗原的质量及浓度，特别是样品需要保留蛋白质和蛋白质间的相互作用不被破坏。做好样品制备是IP/Co-IP实验成功的第一步！

抗原为膜蛋白的免疫沉淀实验与其他蛋白相比更具有挑战性，主要面临以下问题：

膜蛋白属难溶蛋白，不易被提取，特别是跨膜蛋白。如果使用较为强效的裂解液提取，则可能会破坏蛋白间的相互作用，如果使用较弱的裂解液提取，对膜蛋白的裂解液又不充分，最终导致实验无结果。

 膜蛋白IP和Co-IP实验样品制备的关键点是：有效提取膜蛋白的同时，又保留它与其他蛋白的相互作用。那么如何做好膜蛋白样品制备呢？

Invent 柱式法 Minute ™质膜蛋白和细胞组分分离试剂盒(Invent Cat#SM-005）Invent  Minute™ 非变性蛋白溶解液（Invent Cat#WA-009）

使用SM-005获取细胞膜结构，再使用WA-010溶解膜蛋白。

富集提取细胞膜蛋白，去除其他组分蛋白，有效提高样品中目标蛋白含量。

提取过程不使用表面活性剂（去垢剂）及EDTA，获得有活性的细胞膜结构沉淀，不影响蛋白活性及蛋白间互作关系。

提取细胞膜结构后，使用非变性蛋白溶解液，高效溶解膜蛋白的同时，保持蛋白天然构象。

分离膜蛋白的同时，可获得细胞核组分，细胞浆组分，细胞器组分，也可用于验证。

分离过程不使用特殊仪器，仅需桌面台式离心机（离心力可达16000Xg）即可。

分离操作简单，通过离心移液操作，1小时即可完成全过程。

分离出的膜蛋白，得率高，纯度好。

IP（免疫沉淀）图片来源：doi.org/10.1016/j.gendis.2019.12.010 

Zhong W等人[1]在PTCH1变异导致口面裂的研究中，为了阐明杂合R945X变异的致病性，进行了生化实验，以确定蛋白质功能是否受到影响。将两种质粒（FLAG-PTCH1 WT和R945 X）转染到HEK-293 FT细胞中，使用Minute ™质膜蛋白和细胞组分分离试剂盒 (Invent Cat#SM-005)分离质膜蛋白，Input检测野生型PTCH1与R945X突变体的蛋白表达无明显差异。然后进行免疫沉淀分析和免疫印迹分析。与野生型蛋白相比，R945X突变体在免疫沉淀试验中显示出约低75%的相对丰度(p