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作者：

李小晶

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摘要：

本文主要研究了虎杖中有效成分的提取,以及虎杖提取物和虎杖苷标准品对弹性蛋白酶活性的抑制作用. 分别比较了热水浸渍法,乙醇回流法及乙酸乙酯回流法对虎杖中有效成分的提取,考虑提取率,分离难易程度等因素,实验确定以热水浸渍法提取虎杖.经热水提取的红褐色粉末为虎杖粗提取物,定义为CE1.CE1经聚酰胺逐层析,采用乙醇-水梯度洗脱,得到的有效成分定义为CE2.采用UV及HPLC对CE1和CE2进行定性及定量分析,可知CE1和CE2中均含有虎杖苷,虎杖苷的含量分别为41.01 %和69.59 %.另外通过LC-MS分析,初步推测了CE1和CE2中可能含有的成分. 利用紫外分光光度计在波长495 nm处分别测定CE1,CE2和虎杖苷标准品对弹性蛋白酶活性的影响.实验结果表明,CE1,CE2和虎杖苷标准品均能显著的抑制弹性蛋白酶的活性,随着浓度的升高,抑制作用不断增强,当浓度为2.0 mg/mL时,CE1,CE2和虎杖苷对弹性蛋白酶的抑制率分别为53.56 %,61.27 %和82.53 %. 利用荧光分光光度计分别研究并比较了CE1,CE2和虎杖苷标准品对弹性蛋白酶的荧光猝灭作用.实验结果表明CE1,CE2和虎杖苷标准品均能显著猝灭弹性蛋白酶的内源荧光,当浓度为100 ug/mL时,荧光猝灭率分别为70.38 %,72.90 %和75.99 %,猝灭方式以静态猝灭为主,不同温度下的结合常数0.9562和0.9811均接近于1,说明二者能形成1︰1的络合物,即存在1个结合位点.根据热力学参数可知,虎杖苷标准品与弹性蛋白酶之间的反应属于自发的放热反应,推测疏水力和氢键可能是虎杖苷与弹性蛋白酶之间的作用力.

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关键词：

虎杖提取物 弹性蛋白酶 抑制 荧光猝灭

被引量：

1