培养基配置与储存 |
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实验材料 基础培养基（液体或干粉）、PET/PETG方形试剂瓶、血清（常规为FBS/NBS）、补充剂、移液枪、电动移液枪、15mL、50mL无菌离心管、灭菌超纯水、盒装无菌吸头、血清移液管、超净工作台、双抗（青链霉素混合液）、杯式滤器(0.22μm PES膜)、针式滤器 (0.22μm PES膜)实验准备 血清准备：配置培养基前一天，将所需血清从-20℃冰库取出，放置入2-8℃冰箱缓慢解冻储存，使用前37℃水浴加热。培养基准备：液体基础培养基使用前37℃水浴加热。实验流程 基础培养基配置（干粉）： 根据配置体积，选择合适的灭菌后容器，在容器中倒入约90%体积的超纯水，将培养基干粉全部倒入该容器中，用少量超纯水将袋内残留粉末洗出。搅拌30min使所有成分完全溶解，待溶液澄清后，根据说明书加入适当量的碳酸氢钠（分析纯），继续搅拌5-10min至溶解，随后超纯水定容并调节PH值。(过滤会使培养基PH值稍微偏高，所以用1mol/L氢氧化/钠溶液或1mol/L盐酸溶液调整PH值至7.20-7.30）使用0.22μm杯式滤器或0.22μm针式滤器过滤除菌，并按照日常使用规格分装入PET/PETG方形试剂瓶中，2-8℃条件下避光保存备用。【菌检合格后方可使用】培养基配置：若含有补充剂，用1000μL无菌吸头取出适量预热完成的基础培养基，注入补充剂西林瓶中，将其充分溶解，再将含有补充剂的培养基转移入基础培养基中。 接着按照血清使用比例，用血清移液管吸取适量预热完成的血清，注入基础培养基中，盖上瓶盖充分混匀。 双抗加入：除了特殊筛选系统外，一般正常培养状态下，培养基中不添加任何抗生素。若为防止细菌、真菌污染，或怀疑细胞污染需要清除细菌，可以加入青霉素-链霉素双抗溶液，其培养基中的终浓度为青霉素100U/ml，链霉素为100ug/ml。培养基保存：将配置后的完全培养基2-8℃条件下，避光保存备用；或按照使用需求分装入对应规格的PET/PETG方形试剂瓶中。隔夜或1-2天后观察完全培养基，溶液澄清通透且无染菌，方可使用。使用多余的血清，按照剩余量，可分装入15mL/50mL的无菌离心管中（防止血清冻存后膨胀泄露问题，离心管工作体积建议为80%），亦可分装入合适规格的PET/PETG方形试剂瓶中，并用封口膜封口，-20℃条件下避光保存。 |
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