体积摩尔浓度（即物质的量浓度）可简写为 M ，表示mol/L

nM (nmol/L)

μM (μmol/L)

mM (mmol/L)

M (mol/L)

查文献：药物IC50值（如10μM）

药物的浓度（终浓度）一般应在nM～μM级，而母液常规是10～30 mM（in DMSO）

药物浓度梯度点为6～10个为宜（包含0浓度）；

过少：可能绘制不出好的线

过多：96孔板不宜安排排布, 配药加药容易出错。

常见浓度梯:2、3、5、或10，以3为最常用

2倍：

0, 0.1, 0.2, 0.4, 0.8, 1.6, 3.2, 6.4 μM;

0, 1, 2.5, 5, 10, 25, 50, 100, 250 nM;

3倍：

0, 0.3, 1, 3, 10, 30, 100, 300, 1000 nM;

5倍：

0, 1.6, 8, 40, 200, 1000, 5000 nM;

10倍：

0, 0.004, 0.04, 0.4, 4, 40, 400 μM;

实验设计建议：做两轮梯度实验，第一轮粗，第二轮细。

第一轮低点要在最低参考IC50的1/50以下，高点至少要在最高参考IC50的50倍以上。

第二轮等比数列可以缩小一级，或者在第一轮的IC50区间增加密度，但注意第二轮不能太细，或者区间太窄。

应用液：1nmol/μL=1mM

相关文献显示在细胞中IC50为10μM

96孔板

重复6复孔

6个梯度

浓度梯度分组：0μM  2.5μM  5μM  10μM  20μM  40μM

物品准备：配制好的药物、96孔板培养的已贴壁细胞、移液枪、配对枪头、培养基等

每孔中已含有100ul 10%FBS培养基

每孔中加入100ul药物溶液

应用液浓度：1mM

运算：1mM=1000μM；1000μM/80μM=12.5倍

即：将应用液稀释12.5倍

配制最大药物浓度两倍的浓度：80μM

取96μL的药物应用液，加上1104μL的无血清培养基，即将96μL的药物应用液稀释12.5倍，至终体积为1.2mL，即配制出了1200μL的80μM的药品。

40μM：每孔加入100μL的80μM的药品，6个复孔共600μL液体

补入600μL无血清培养基并吹匀，即将剩余药品浓度减半为40μM

20μM：每孔加入100μL的40μM的药品，6个复孔共600μL液体

补入600μL无血清培养基并吹匀，即将剩余药品浓度减半为20μM

10μM：每孔加入100μL的20μM的药品，6个复孔共600μL液体

补入600μL无血清培养基并吹匀，即将剩余药品浓度减半为10μM

5μM：每孔加入100μL的10μM的药品，6个复孔共600μL液体

补入600μL无血清培养基并吹匀，即将剩余药品浓度减半为5μM

2.5μM：每孔加入100μL的5μM的药品

完成加药并孵育到设定时间。