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作者：

宋光庆

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摘要：

目的:1.应用红外光谱技术对尿石成分行定性定量分析,建立定量分析校准曲线回归方程,获取尿石成分资料,为泌尿道结石的成因研究积累资料; 2.应用高效液相色谱技术分析24小时尿液中的微量有机酸,建立草酸,枸椽酸的工作曲线,获取24小时尿液成分资料,为泌尿道结石的成因研究积累资料; 3.分析草酸钙结石患者24小时尿液成分变化,为探讨草酸钙结石的成因提供依据; 4.探讨CT在预测一水草酸钙结石碎石脆性中的价值,为草酸钙结石的治疗提供帮助. 方法:对尿石症患者,术前常规行24小时尿液成分分析和CT扫描,获取尿石症患者24小时尿液成分资料和尿结石的CT影像学资料,术后采用傅立叶变换红外光谱法(Fourier trarlsform infrared spectrophotometer,FTIR)行尿石成分分析.选择草酸钙结石(calcium oxalate,CO)(>94%)患者72例和健康志愿者40例,分为一水草酸钙(calcium oxalate morlohydrate,COM)组,二水草酸钙(calcium oxalate dihydrate,COD)组和正常对照组,对其24小时尿液成分行统计学分析.选择COM(>94%)结石50例为实验对象,行体外冲击波碎石(extracorporeal shockwave lithotripsy,ESWL),记录碎石次数,将COM结石分为CT结构同质组,CT结构异质组,介于二者之间组,对其碎石次数行统计学分析;将COM结石分为高CT值组,低CT值组,对其碎石次数行统计学分析. 1. 24小时尿液成分分析方法:尿草酸,尿枸椽酸的测定采用高效液相色谱法(high performance liquidchromatography,HPLC),以不同浓度草酸(99.8%)和枸椽酸(99.8%)为标准液制备标准曲线,尿液样品经酸化,过滤,除蛋白,冷却,离心后进样,测定曲线下面积,计算草酸及枸橼酸的含量;尿量以量筒准确量取;尿PH值以精密PH计测定;尿钙,尿镁的测定采用乙二胺四乙酸二钠络合滴定法;尿磷的测定采用钼兰比色法;尿酸的测定采用磷钨酸比色法. 2. 尿石成分分析方法:FTIR分析采用透射法测其吸收光谱,定性分析时将所得样品红外光谱图与尿结石成分谱库中标准谱图对照,根据特征峰频率,强度及峰宽等判断结石成分,定量分析采用校准曲线法,先建立校准曲线回归方程,再根据定性分析结果选择适当的曲线行定量分析. 3.CT值的测量及CT结构异质性评估方法:测定CT值时,分测三个层面,每个层面取三等分点,分别记录各点CT值,计算总体CT平均值为该结石CT值;行结构异质性评估时,分别由2个不同观察者来判断结石的结构异质性,了解结石的影像学特征,有明显小叶,中空,分层及异常密度影为结构异质,否则为结构同质. 4. 体外冲击波碎石方法:对该50例COM结石行体外冲击波碎石,取市售带皮猪肉一块,鸭肠一段,将结石固定于鸭肠肠腔内,再将鸭肠固定于猪肉,然后将猪肉固定于一自制梯形木板架上,定位后行ESWL,记录碎石次数. 5.统计学分析方法:所有统计学分析都应用SPSS13.0统计软件.将COM(>94%)患者40例,COD(>94%)患者32例和健康志愿者40例分为COM组,COD组,正常对照组,对其24小时尿量,尿PH值,尿钙,尿磷,尿镁,尿酸,尿草酸,尿枸橼酸分别行统计学分析,分别采用单因素方差分析,计量资料用(X±s),组间比较用S-N-K法和LSD法;将COM(>94%)结石50例,根据CT结构异质性分类分为CT结构同质组,CT结构异质组,介于二者之间组,对其碎石次数行统计学分析,采用单因素方差分析,计量资料用X±s,组间比较用S-N-K法和LSD法:将COM(>94%)结石50例,根据CT值大小分为高CT值组,低CT值组,对其碎石次数行统计学分析,采用独立样本t检验,计量资料用X±s. 结果:1.对2006年6月至2007年12月在我科住院的尿石症患者516例行尿石成分红外光谱分析,定性分析时,CO的检出率为70.31%,略低于文献报道的80%以上,COM的检出率为66.67%,略低于文献报道的67-71%;定量分析时,分别建立了校准曲线回归方程,COM在1324cm-1处的校准曲线回归方程:I=-3.06×10-4x-3.03×10-3,r=0.993,COD在1316cm-1处的校准曲线回归方:I=5.50×10-5x+9.20×10-5,r=0.997. 2.采用HPLC法测定24小时尿液中草酸和枸橼酸的含量,分别得到草酸的工作曲线:Aoxa=12528.4Coxa-641.9,r=0.999,枸椽酸的工作曲线:Acit=1607.5Ccit-13.8,r=0.999. 3.对72例COM(>94%)结石患者及40例健康志愿者行24小时尿液成分分析显示:COD组,COM组的尿量明显低于正常对照组(P