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作者：

王小俊

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摘要：

艾叶为菊科植物艾(Artemisia argyi Lévl.et Vant.)的干燥叶,是一种常用中药材,外用散寒止痛,内用温经止血.研究表明其主要有效成分为挥发油,黄酮,鞣酸,多糖等,但前人的研究大部分集中于艾叶挥发油部分,对黄酮部分研究较少.近年发现艾叶中含有丰富的多酚类成分,尤其是黄酮类,表现出广泛的生物活性,在药用和保健品领域具有较大的应用前景.本论文旨在从化学成分,质量控制,纯化工艺和药理活性四个方面对艾叶黄酮进行系统性研究,为后续艾叶黄酮的产品开发提供参考.具体研究分为四个部分:(1)为了阐明艾叶的药效物质基础,对艾叶黄酮部位的化学成分进行了研究.采用硅胶柱层析,凝胶层析和制备液相色谱等手段,对艾叶乙酸乙酯部位进行分离纯化,根据理化性质,光谱数据鉴定化合物结构.经分离鉴定得到14个化合物,分别是(1)artemisolide,(2)蔓荆子黄素,(3)矢车菊黄素,(4)异泽兰黄素,(5)棕矢车菊素,(6)高车前素,(7)5,7,3′-三羟基-6,4′,5′-三甲氧基黄酮,(8)6-甲氧基苜蓿素,(9)茵陈色原酮,(10)芹菜素,(11)5,7,3′-4′-四羟基-6,5′-二甲氧基黄酮,(12)圣草酚,(13)木犀草素-7-O-芸香糖苷,(14)芹菜素-7-O-芸香糖苷,其中化合物13,14为首次从艾叶中分离得到.(2)为比较道地药材蕲艾与其他产地艾叶的区别,需要更系统,全面地质量评价方法,本文首先利用UPLC/LTQ-Orbitrap-MS对艾叶的化学成分进行了定性分析,鉴定了黄酮和酚酸类成分各6种,在此基础上建立艾叶主要成分的UPLC-DAD含量测定方法.采用Xtimate UHPLC C_(18)色谱柱(2.1×100 mm,1.8μm),以乙腈-0.1%甲酸水溶液梯度洗脱,流速0.4 mL·min~(-1),检测波长330 nm,建立12种成分的测定方法,各成分质量浓度与峰面积具有较好的线性关系;精密度,重复性和稳定性良好(RSD3.0%);加样回收率为103.21~109.11%.该方法应用于不同产地艾叶中相关成分的测定,发现蕲艾中有7种成分的含量显著高于其他产地药材.(3)优选大孔树脂分离纯化艾叶醇提物中总黄酮的工艺,通过静态和动态吸附-洗脱试验比较21种不同型号大孔树脂对艾叶总黄酮的吸附和解吸性能,筛选出最佳树脂型号;以总黄酮质量浓度为指标,采用单因素试验考察纯化工艺条件.实验表明AB-8大孔树脂对艾叶总黄酮具有较好的吸附解吸能力.AB-8大孔树脂富集纯化艾叶总黄酮最佳工艺为:吸附液质量浓度为0.74mg/mL,上样流速为2 BV/h,上样量为6 BV,洗脱剂为55%乙醇,洗脱剂用量为6 BV,洗脱流速为2 BV/h.该优选工艺稳定可行,适用于艾叶总黄酮的分离纯化及标准提取物的制备.(4)为评价大孔吸附树脂纯化艾叶总黄酮的药用价值,深入研究了艾叶总黄酮(AATF)的抗炎和抗氧化活性.以LPS刺激RAW264.7细胞构建体外炎症模型,采用Griess法和ELISA法分别检测AATF干预下,RAW264.7炎症细胞中的炎性介质,炎性细胞因子的水平.结果发现AATF可明显抑制LPS诱导的RAW264.7细胞中NO,ROS,PGE_2,IL-6,IL-10和MCP-1的含量,且对COX-2酶的活性有一定抑制作用.表明AATF能通过抑制细胞炎性介质,细胞因子的分泌以及COX-2的活性的来改善炎症反应.为对AATF抗氧化活性进行评价,同时进行了DPPH,ABTS,FRAP,羟自由基和超氧阴离子清除活性试验,结果显示AATF的EC50分别为34.0,98.6,59.2,246.2,15.5μg/mL,表明艾叶黄酮亦具有良好的抗氧化活性,该结果为艾叶黄酮的开发利用提供实验数据和理论依据.

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