HPLC

原理

高效液相色谱法是在经典色谱法的基础上，引用了气相色谱的理论，在技术上，

流动相改为高压输送（最高输送压力可达

4.9´

107Pa

）

;

色谱柱是以特殊的方法

用小粒径的填料填充而成，

从而使柱效大大高于经典液相色谱

（每米塔板数可达

几万或几十万）；同时柱后连有高灵敏度的检测器，可对流出物进行连续检测。

特点

1

．高压：液相色谱法以液体为流动相（称为载液），液体流经色谱柱，受到阻

力较大，为了迅速地通过色谱柱，必须对载液施加高压。一般可达

150

～

350×

105Pa

。

2. 

高速：流动相在柱内的流速较经典色谱快得多，一般可达

1

～

10ml/min

。高

效液相色谱法所需的分析时间较之经典液相色谱法少得多，一般少于

1h 

。

3. 

高效：近来研究出许多新型固定相，使分离效率大大提高。

4.

高灵敏度：高效液相色谱已广泛采用高灵敏度的检测器，进一步提高了分析的

灵敏度。如荧光检测器灵敏度可达

10-11g

。另外，用样量小，一般几个微升。

5.

适应范围宽：气相色谱法与高效液相色谱法的比较：气相色谱法虽具有分离能

力好，灵敏度高，分析速度快，操作方便等优点，但是受技术条件的限制，沸点

太高的物质或热稳定性差的物质都难于应用气相色谱法进行分析。

而高效液相色

谱法，只要求试样能制成溶液，而不需要气化，因此不受试样挥发性的限制。对

于高沸点、热稳定性差、相对分子量大（大于

400 

以上）的有机物（这些物质

几乎占有机物总数的

75% 

～

80% 

）

原则上都可应用高效液相色谱法来进行分

离、分析。

据统计，在已知化合物中，能用气相色谱分析的约占

20%

，而能用

液相色谱分析的约占

70

～

80%

。

高效液相色谱仪一般分为四个部分：

高压输液系统、

进样系统、

分离系统和

检测系统。

此外还可以根据一些特殊的要求配备一些附属装置，

如梯度洗脱、

自

动进样及数据处理装置等，如图

1

所示。