酶法组织消化中常用的胶原酶（Collagenase），能特异性地降解胞外胶原蛋白，使胶原蛋白和纤维粘连蛋白的网状结构解离，而不损坏细胞表面结构的完整性。由于细胞外基质的成分复杂，除胶原蛋白外，还含有弹性蛋白， 糖蛋白等其他大分子结构。而且不同组织类型，不同物种来源，不同年龄的组织中胞外基质组份不同。所以商业化的胶原酶产品一般是梭状芽孢杆菌裂解液的粗提物，是胶原酶、胰蛋白酶等蛋白水解酶混合物，能降解胶原蛋白和其他蛋白，及多糖等胞外大分子物质，适用于多种组织的消化应用。

但是对于不同实验研究中分离的特定组织，需要根据经验来选择合适的胶原酶产品，并对酶浓度、酶体积、酶作用时间进行摸索，才能找到最佳的消化方案。

罗氏胶原酶产品选择示例

罗氏胶原酶产品提取自溶组织梭状芽孢杆菌（Clostridium histolyticum），并根据不同的酶活和验证的功能应用分为Collagenase A/B/D/P/H五类产品。被广泛应用于各种组织中（如肺、心脏、肌肉、骨、脂肪组织、肝、肾、软骨、乳腺、胎盘、血管、脑组织和肿瘤组织等）单个细胞的分离。应用其获得的细胞产量、活度和细胞功能性均经过严格的产品质量控制和验证。

罗氏胶原酶分类

主要酶组分

建议的组织应用（根据文献中的产品引用）

Collagenase A

胶原酶I型，胶原酶II型，梭菌蛋白酶，胰酶，中性蛋白酶

常规的酶混合比率，中度酶活

卵母细胞

肺细胞

Collagenase B

胶原酶I型，胶原酶II型，梭菌蛋白酶，胰酶，中性蛋白酶

中至高度胶原酶活性，较高的梭菌蛋白活性（>10U/mg）

心肌细胞

软骨细胞

胚胎前驱细胞

Collagenase D

胶原酶I型，胶原酶II型，梭菌蛋白酶，胰酶，中性蛋白酶

中至高度胶原酶活性，极低的胰酶活性（98%的内毒素和其他死细胞成分，因此有助于在组织消化过程中，大大提升细胞的活率。Liberase系列产品均经过滤除菌，具有高度的批间一致性，保证了整个实验阶段的消化质量和重复性。

Liberase系列产品

 胶原酶含量（mg/管）

胶原酶活性(Wünsch units/管)

中性蛋白酶量

中性蛋白酶作用于组织的酶活性

中性蛋白酶类型

内毒素

(EU/mg)

Liberase DL

5mg

50mg

26

260

低

+

Dispase

≤50

Liberase DH

5mg

50mg

26

260

高

+++

Dispase

≤50

Liberase TL

5mg

50mg

26

260

低

++

Thermolysin

≤50

Liberase TM

5mg

50mg

26

260

中等

++++

Thermolysin

≤50

Liberase TH

5mg

50mg

26

260

高

+++++

Thermolysin

≤50

罗氏胶原酶与Liberase系列产品的替换比较

罗氏胶原酶

特性

Wünsch units/mg

相应活性的Liberase产品

Collagenase A

粗制酶混合物

0.15

Liberase TM

Collagenase B

粗制酶混合物

0.15

Liberase TH

Collagenase D

粗制酶混合物

0.15

Liberase TM

Collagenase P

粗制酶混合物

1.50

Liberase TL, Liberase DL

Collagenase H

粗制酶混合物

0.15

Liberase TM

小贴士：1. Liberase系列产品根据胶原酶和中性蛋白酶的不同配比，分为不同消化活性的5种产品。您可以参考其他实验室的研究或已发表文献，进行合适产品的选择和操作流程参考。https://www.roche-applied-science.com/sis/collagenase/index.jsp?id=col_0301002. 对于新的组织细胞的消化尝试，建议从Liberase TM开始您的实验，Liberase TM的消化活性范围对各种组织具有良好的通用性。3. Liberase中Collagenase I + II 的纯度很高，与常规胶原酶消化实验相比，通常需将孵育时间减少10 – 30%。

请注意：Liberase Research Grade产品和其他消化酶产品仅供生命科学研究和体外研究使用。请勿将此产品用于临床和诊断程序（如人胰岛移植）。

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