支气管肺泡灌洗小鼠肺分析炎症细胞浸润 (Scientific Article Protocol)

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支气管肺泡灌洗小鼠肺分析炎症细胞浸润 (Scientific Article Protocol)

2024-07-09 19:21| 来源: 网络整理| 查看: 265

BAL是一种有用的技术,以获得细胞学和生物化学信息响应于感染或药物。最初,BAL用于管理从光气中毒3的人类患者的分泌过多粘液。如今,该技术在人类中用于研究肺发病机理,诊断,和疾病3,24治疗管理。在动物实验中,BAL通常用于监测发生在肺气道1,2炎症应答,免疫机制,以及感染性疾病的进程。

为了研究在呼吸系统疾病模型中的炎症细胞的图案,BAL之后应绝对和差分细胞计数。除了绝对细胞数量,相对细胞数量也是令人感兴趣的。例如,维修和癌症模型显示vERY小到无BAL细胞计数升高。在此模型中,细胞组合物的评估是有用的。通过使用细胞染色,在光学显微镜组合,不同的细胞类型,例如嗜酸性粒细胞,嗜中性粒细胞,巨噬细胞和淋巴细胞,可以基于形态25,26,27,28,29,30确定。流式细胞术可用于特定评估,如识别不同的T细胞表型7,31。除了不同的浸润细胞群的鉴定,肺的非细胞组合物可以使用BAL进行调查。方法,如ELISA,免疫印迹,细胞因子微球阵列,免疫组织化学和定量聚合酶链反应是在BAL流体执行,以确定细胞因子,生长因素和其他炎症成分。为了确定肺损伤,BAL液中的总蛋白和乳酸脱氢酶水平也可以被测量32,33 。

随着新的诊断工具的发展,BAL组件的基因组和蛋白质组学特征将在不久的将来成为可能。扩展计算能力和高通量基因表达技术的组合将使得可以定义各种疾病状态的具体基因表达谱。在BAL液上进行这些技术可以提供基因和蛋白质表达模式,以确定参与肺部疾病不同阶段的重要分子。

从BAL流体获得的数据的主要限制是不同研究试验之间缺乏可比性3,9。有很高的程度灌洗技术的变异性和随后的BAL液处理。为了能够比较每个BAL试验,有必要标准化灌注的灌洗液的类型,滴注部位和细胞和非细胞组成要分析的部分。不同试验之间灌洗部分数量存在显着差异,从1到14倍34,35,36不等。这种差异可能对肺中估计的总细胞数有影响。重要的是要知道哪个BAL液体馏分含有大部分的细胞。宋等显示细胞总数约70%以1至3分之22进行检索。然而,其他报告表明,第二次灌洗液比第一次灌洗液中含有更多的细胞37,38 >。我们可以从这些研究得出结论,只有一个部分的灌洗不代表整个肺,导致结果的误解。

BAL液的非细胞组成包含有关33,39,40肺部健康状况的有价值信息。 BAL液稀释的变化有助于可溶性级分的定量差异,从而导致试验结果差异。宋等比较每个灌洗部分的蛋白质和乳酸脱氢酶水平,并得出结论,第一次灌洗部分含有比第二部分多2-3倍。

要检索代表性的BAL样品进行分析,一些技术考虑是至关重要的。其中一个是进行适当的麻醉。检查脚参数非常重要鼠标的lex,以确保终端镇静。这不仅对道德原因很重要,而且因为如果鼠标没有被适当地麻醉,那么难以将导管放置并保持在正确的位置。

第二个重要的技术问题是导管在气管中的位置。当导管插入太深时,可能会损伤肺结构。在BAL过程中,导管的远端不应到达肺部。导管也应稳定并用棉线捆扎。如果导管不稳定,注射的盐水溶液可能向上流入鼻腔而不是向下流入肺。在注射和吸入盐水溶液时,保持导管是很重要的。

从BAL液获得的数据必须代表整个鼠肺。因此,重要的是滴入足够量的盐水缓冲液( 即3mL,分3份,每份1mL)。细胞产量与BAL液产量之间没有线性关系。在按摩老鼠胸部时轻轻收集溶液是重要的。如果剪切力太强,气道和BAL液中的细胞的活力,功能和结构可能会受到影响。如果吸入的液体在注射器中不可见,请小心地将导管在气管中更深或更高地移动。

应特别注意BAL处理和分析的具体方面。这将最大化BAL样本中保留的信息。在BAL之后,细胞处于营养不良的盐水介质中。因此,在BAL采样后1 h内处理样品非常重要。如果需要长时间的储存,则需要使用补充营养的培养基。

为了保持细胞活力,避免促进细胞粘附于表面的管。避免ce在有可能损害细胞的完整性,或防止所检索的BAL细胞的均匀悬浮速度细胞悬浮液的ntrifugation。 BAL含有流体细胞应在400×g下在4℃下进行7分钟进行离心。重要的是要记住,细胞悬浮液应在4℃下处理期间举行是很重要的。



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