RNAeasy动物小RNA抽提试剂盒(离心柱式)(R0028) |
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碧云天的离心柱式RNAeasy™小RNA抽提试剂盒(RNAeasy™ Small RNA Isolation Kit with Spin Column),也称离心柱式miRNA抽提试剂盒(miRNA Isolation Kit with Spin Column),是一种基于离心柱法从动物组织或培养的动物细胞中安全、快速、便捷、稳定、高效、高质量地抽提miRNA等小于200个核苷酸(nucleotide, nt)的小RNA(small RNA)的试剂盒。 本试剂盒抽提得到的小RNA可用于反转录、RT-PCR、qPCR、Northern等常规实验,也可以用于基因芯片分析 (microarray)、高通量测序(high throughput sequencing)等对小RNA质量要求较高的情况。 碧云天的三款离心柱式及Trizol法RNA抽提试剂盒的主要特点和差异如下: 产品编号 R0024/ R0026/ R0027 R0028 R0032 R0011/R0016 产品名称 RNAeasy™动物RNA 抽提试剂盒 RNAeasy™动物小RNA 抽提试剂盒 RNAeasy™ Plus动物RNA 抽提试剂盒 Beyozol Trizol 推荐指数 ★★★★★ ★★★★★ ★★★ ★★ 抽提方式 离心柱式 离心柱式 离心柱式 原始方式 抽提产物 RNA(>200nt) 小RNA( 总RNA (含 总RNA (含 操作时间 最短(15-20分钟) 稍较长(20-25分钟) 较长(25-30分钟) 最长(45-60分钟) 操作步骤 4步骤(少) 6步骤(多) 6步骤(多) 很多步骤 使用便捷性 ★★★★★ ★★★★ ★★★★ ★★ 推荐细胞量/得率 50-100万/5-20μg 50万/1-2μg 50-100万/5-20μg 50-100万/5-20μg 推荐组织量/得率 5-20mg/10-40μg(多) 5mg/1-1.5μg(少) 3-5mg/3-10μg(少) 50mg/100-500μg(很多) RNA纯度 高 高 高 高 有毒有害试剂 无 无 无 有 人体与环境安全 高 高 高 低 国外同类产品 RNeasy Mini Kit (Qiagen) PureLink® RNA Mini Kit (Thermo) PureLink® miRNA Isolation Kit (Thermo) miRNeasy Mini Kit (Qiagen) TRIzol (Thermo) 用途 非小RNA相关各种用途 小RNA相关各种用途 不同长度RNA各种用途 不同长度RNA各种用途动物组织或细胞中的RNA按照长度可以分为长链RNA(long RNA)和小RNA(small RNA),长链RNA通常大于200nt(也常被称为总RNA),而小RNA通常小于200nt。长链RNA按照是否编码蛋白或多肽可以分为长链非编码RNA(long noncoding RNA, lncRNA)和mRNA。小RNA主要包括非编码的5.8S rRNA(ribosomal RNA)、5S rRNA、tRNA(transfer RNA)、microRNA(miRNA)、siRNA(small interfering RNA)、piRNA(Piwi-associated small RNA)、tsRNA(tRNA-derived small RNA)、srRNA(small rDNA-derived RNA)等。 本试剂盒抽提小RNA的基本流程如图1所示。样品在裂解液中迅速裂解,释放出总RNA,然后在两次高速离心过程中,通过离心柱将不同大小的RNA分离。第一次过柱时,200nt以上的RNA特异性结合到纯化柱上,而200nt以下的小RNA穿柱而过被收集到液体收集管中;第二次过柱时,特定的结合体系使小RNA结合到另一个纯化柱上。然后通过2次洗涤充分去除非特异性结合的蛋白、盐等杂质,最后用洗脱液将高纯度的小RNA洗脱下来。
本试剂盒使用安全。本试剂盒通过特殊的柱纯化介质进行小RNA分离纯化,不仅能有效避免传统的Trizol法抽提时使用的酚、氯仿等有毒有害有机试剂,也能有效避免如国外知名的Q品牌等公司使用类似于Trizol的裂解液裂解样品、接着使用氯仿分层、后续再进行柱纯化等涉及的有毒有害有机试剂。 本试剂盒使用快速、便捷。本试剂盒采用柱纯化,无需繁琐的RNA沉淀步骤,抽提操作过程仅20-25分钟。相比于传统的Trizol抽提法,本试剂盒能够有效去除大分子RNA,操作流程显著简化,缩短了抽提时间,降低了RNA降解的风险。和国外同类柱纯化产品相比,所需操作步骤和操作时间基本一致。 本试剂盒抽提获得的小分子量RNA得率高、纯度好。100万培养动物细胞约能抽提得到1-2μg小RNA,5mg小鼠肝脏组织约能抽提得到1-1.5μg小RNA。A260/A280通常为2.0-2.2。本试剂盒与国际知名T品牌同类产品的抽提效果对比图参见图2。
本试剂盒用于抽提18-200 nt小RNA,主要包括5.8S rRNA、5S rRNA、tRNA、microRNA (miRNA),以及short interfering RNA (siRNA)、piRNA、tsRNA等,能够有效去除基因组DNA和200nt以上的RNA,如28S rRNA、18S rRNA、mRNA等。 本试剂盒适用于新鲜或冻存的动物组织或细胞样品小RNA的抽提。样品的用量对抽提效果影响较大,样品用量过多会导致在第一次过柱时不能最大程度去除200nt以上的RNA,通常建议培养细胞的用量不超过100万,动物组织的用量不超过5mg。 本试剂盒可用于50个样品的小RNA抽提。 包装清单: 产品编号 产品名称 包装 R0028-1 裂解液 16ml R0028-2 结合液I 16ml R0028-3 结合液II 38ml R0028-4 洗涤液 63ml R0028-5 洗脱液 5ml R0028-6 RNA纯化柱及废液收集管 100套 R0028-7 RNA洗脱管 50个 — 说明书 1份保存条件: 室温保存,一年有效。 注意事项: 对于富含RNase的样品(如动物组织),建议使用前在裂解液中添加二硫苏糖醇(Dithiothreitol, DTT)至终浓度为40mM (例如1ml裂解液中加入20μl 2M DTT)或β-巯基乙醇至终浓度为1% (如1ml裂解液中加入10μl β-巯基乙醇),含DTT或β-巯基乙醇的裂解液可在室温放置1个月。 本试剂盒提供的所有试剂和耗材都是RNase-free,操作时应小心,避免被污染。所有自行准备的试剂和耗材也都应是RNase-free。如果可能有RNase污染,可考虑用0.01%的DEPC水浸泡过夜,然后高温高压灭菌并烘干。操作时应避免对着样品或所使用的试剂盒耗材呼气或说话,以防RNase污染。建议戴一次性口罩操作。 对于操作环境中RNA酶的去除,推荐使用碧云天生产的RNase and DNase Away (R0123)以去除实验桌面上或其它接触面上的RNase。 使用冻存的细胞或组织抽提小RNA的效果通常比新鲜的细胞或组织差一些。因为在细胞或组织冻融过程中一些细胞或组织内的RNase会被释放出来并剪切样品中的RNA。对于组织样品,推荐使用碧云天生产的RNALater™动物组织RNA稳定保存液(R0118)进行保存以保证样品RNA的完整性。 本试剂盒所有操作均在室温进行,操作时无需冰浴。所有离心也均在室温进行。 废液收集管在一次抽提中需多次使用,切勿中途丢弃。 结合液I、结合液II和洗涤液中含有乙醇,使用后须旋紧瓶盖以防挥发,并须按照易燃试剂的相关规范进行存放和使用。 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 |
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