“

分子手术刀

”——

限制性核酸内切酶（限制酶）

（

1

）来源：主要是从

原核生物

中分离纯化出来的。

（

2

）功能：能够识别双链

DNA

分子的某种

特定

的核苷酸序列，并且使每一条链中

特定

部位的两个核苷酸

之间的

磷酸二酯键

断开，因此具有

专一

性。

（

3

）结果：经限制酶切割产生的

DNA

片段末端通常有两种形式：

黏性末端

和

平末端

。

“

分子缝合针

”——

DNA

连接酶

(1)

两种

DNA

连接酶（

E·

coliDNA

连接酶和

T

4-

DNA

连接酶）的比较：

①相同点：都缝合

磷酸二酯

键。

②区别：

E·

coliDNA

连接酶来源于

T

4

噬菌体

，只能将双链

DNA

片段互补的

黏性末端

之间的磷酸二酯键连

接起来；而

T

4

DNA

连接酶能缝合

两种末端

，但连接平末端的之间的效率较

低

。

(2)

与

DNA

聚合酶作用的异同

:DNA

聚合酶只能将

单个核苷酸

加到已有的核苷酸片段的末端，

形成磷酸二酯

键。

DNA

连接酶是连接

两个

DNA

片段

的末端，形成磷酸二酯键。

2

、载体

（

1

）条件：

①

能在宿主细胞中稳定保存下来并大量复制。

①

有一个至多个限制性核酸内切酶切割点，以便与外源基因连接。

①

具有特殊的标记基因，便于筛选。

（

2

）种类：

质粒（常用）

、

γ

噬菌体的衍生物、动植物病毒。

（

3

）作用：

①

作为运载工具，将目的基因转移到宿主细胞内；

①

利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量复制。