基因组

DNA

的提取与电泳鉴定

一

. 

【实验目的

】

掌握基因组

DNA

的提取原理和方法

二

. 

【实验仪器与试剂

】

实验仪器：琼脂糖凝胶电泳系统、紫外反射透射分析仪、离心机、恒温水浴锅

实验试剂：氯仿、巯基乙醇、植物基因组

DNA

提取试剂盒（离心柱型）

三

. 

【实验原理

】

实验中有两种提取

DNA

的方法，即试剂盒提取法和普通手提法，本次试验采用试剂盒提取法。

试剂盒方法：试剂盒中有特异性结合

DNA

的离心吸附柱和独特的缓冲液系统，离心吸附柱是一

种硅基质材料，可以高效、专一吸附

DNA

，最大限度去除植物细胞中杂质蛋白及其他有机化合

物。

普通手提方法：用机械的方法使组织和细胞破碎，加入

SDS

等离子型活性剂，溶解细胞膜和核

膜蛋白。

加入酚氯仿等表面活性剂使蛋白变性。

离心，除去组织和变性蛋白，上清液中加入冰冻

的无水乙醇使

DNA

沉淀，离心，弃上清，用

70%

乙醇漂洗

DNA

，倒掉上清，风干，溶于灭菌

的双蒸水中。

四

. 

【实验内容与步骤

】

1.

取出处理过的新鲜藻体

0.1g

，用液氮研磨至粉状。

2.

将研磨好的粉末迅速转移到预先装有

700

μ

l 

65

℃预热缓冲液

GP1

的离心管中（实验前在预热

的

GP1

中加入

β

-

巯基乙醇，使其终浓度为

0.1%

）

，

迅速颠倒混匀后，

将离心管放在

65

℃水浴中

加热

20

分钟，水浴过程中颠倒离心管以混合样品数次。

3

、加入

700

μ

l

氯仿，充分混匀，

12000rpm 

离心

5min

。

4

、小心将上一步所得上层水相转入一个新的离心管中，加入

700

μ

l

缓冲液

GP2

，充分混匀。

5

、

将混匀的液体转入吸附柱

CB3

中，

12000rpm

离心

30s

，

弃掉废液

（吸附柱容积为

700

l

左右，

可以分次加入离心）。

6

、向吸附柱

CB3

中加入

500

μ

l

去蛋白液

GD

（使用前确认是否加入无水乙醇），

12000rpm 

离心

30s

，弃掉废液。