初生组织是研究表征疾病状态的细胞内和细胞外标记物的有价值的工具。我们开发了一种从完整组织中快速分离细胞因子和信号分子的方案。本方法用于提取总蛋白，并使用非研磨性组织提取试剂。使用本方案可以提取低至10mg的组织样本。此方法灵敏度高，并且能够检测与疾病相关的生物标记波动情况。这是从各种组织类型中提取蛋白的有效系统。已使用本方案成功提取心脏、肺、肾、脾、脑、肝、胸腺和平滑肌组织。制备的提取物适用于多种免疫检测，如ELISA和Invitrogen™ Luminex™平台，以及所有常规的蛋白检测。我们的提取方法价格低廉，用途广泛，可以在15分钟内完成。我们提供细胞提取缓冲液，用于从各种组织样本中提取总蛋白。

使用以下配方制备1x细胞提取缓冲液：

细胞提取缓冲液配方

    * 10 mM Tris, pH 7.4    * 2 mM Na3VO4    * 100 mM NaCl    * 1% Thermo Scientific™ Triton™ X-100    * 1 mM EDTA    * 10%甘油    * 1 mM EGTA    *  0.1% SDS    * 1 mM NaF    * 0.5%脱氧胆酸盐    * 20 mM Na4P2O7

可订购此细胞提取缓冲液———货号：FNN0011。

此细胞提取缓冲液可以在微量离心管中分成1x的等分试样，使用前在-20℃下储存。提取细胞前先在冰上解冻。

需要的其他试剂：

1 mM PMSFSigma蛋白酶抑制剂片剂（货号：P-2714）

此细胞提取缓冲液必须在使用前补充1 mM PMSF（单独订购）和蛋白酶抑制剂片剂（单独订购），以制成完整的细胞提取缓冲液。抑制细胞提取物中的蛋白水解必须添加蛋白酶抑制剂片剂和PMSF。对于PMSF的添加，我们建议在DMSO中制备0.3 M的储备液，并添加足够的体积以达到1 mM的终浓度（即每5 ml细胞提取缓冲液17 μl）。PMSF非常不稳定，即使之前添加过，也必须在使用前添加。对于蛋白酶抑制剂片剂的添加，我们推荐采用Sigma（货号：P-2714），根据生产商的说明重新配制，并加入250μl/5ml细胞提取缓冲液。添加蛋白酶抑制剂的细胞提取缓冲液在4℃温度下能够稳定24小时。

细胞处理

此方法可用于在所研究的每种刺激方式下产生相对大量的细胞提取物。本程序中的洗涤步骤有助于将细胞提取物中的培养基成分降至最低。