实验记录｜细胞培养、传代、冻存、复苏（下）昨天已经介绍了细胞的传代，今天记录细胞的冻存、复苏，铺板的内容我会单独跟细胞计数一块放出来，前边的步骤基本一样，建议大家先参考第一篇再来接着往下看～B.细胞冻存：冻存液配置：70%完全培养基+20%FBS+10%DMSO,上述细胞离心后倒掉上清液，加入适量冻存液充分混匀，分装至冻存管中，－80℃冰箱保存，原则：慢冻快溶。C.细胞复苏：C1：将冻存细胞从－80℃冰箱或液氮罐中取出，立即放入37℃恒温水浴锅中（也可以用手摩擦）化冻，原则：慢冻快溶。C2：加入适量培养液，在室温下放入离心机：低速离心1200rpm 4℃ 5min（离心速度、温度、时间根据细胞不同有所差异），并弃去上清液；C3:加入适量新鲜培养基充分吹打混匀，将混悬液根据需要分装至新的培养皿中继续培养，用8字或者十字摇匀法使细胞平铺均匀，并在显微镜下观察细胞数目、密度、状态等，放入37℃ 5%CO2 80%湿度的恒温箱培养。四、注意事项：1. 无菌原则：操作前将需要用到的物品以及超净工作台提前用紫外线照射30min，操作过程中拿放物品时勤用酒精消毒手及物品，操作时手尽量不要从敞开容器口的上方经过，移液管和枪头注意及时更换及用酒精棉球擦拭，实验完毕及时收拾操作台面，用酒精棉球擦拭台面。2. 记录：提前做好实验记录，并记录好姓名、细胞名、日期等，冻存细胞应标注传代次数、冻存日期、复苏次数等。其他问题以后会慢慢总结，此记录仅为了学习参考，如有不足之处还望大家提出，我们共同讨论学习，共同进步，等有时间详细记录一下细胞计数及铺板，今天到这里啦，以后会慢慢记录更多的实验记录。