程序冻存液配方

程序冻存液成分一般由基础培养基、胎牛血清、DMSO组成。血清比例为10%~90%，DMSO比例为5%~10%。根据实验室经验，推荐冻存液配比：55%基础培养基＋40%胎牛血清＋5%DMSO，难养细胞可用90%胎牛血清＋10%DMSO冻存。

DMSO在低温下能保护细胞，但在常温下却对细胞有害，复苏时动作要快，尽快洗掉DMSO，否则会造成对细胞严重的毒性。DMSO是目前最好的细胞冻存保护剂，但也是一种以细胞毒性很大的化学试验剂。

DMSO能损伤细胞使用它时需要有一定浓度。细胞给药时化合物的溶剂 DMSO在细胞给药溶解化合物时应严格控制DMSO的使用剂量。不同细胞可能对DMSO含量的敏感程度不一样，但是现在比较能接受的是采用DMSO配制化合物进行细胞给药时，DMSO的终浓度控制在0.1%以内是被认为对细胞实验没有干扰的，即1ml培养基中，DMSO体积不能超过1μl。如果发现体积超过这个比例，我们可以通过提高药物浓度， 或者采用水相多步稀释法来降低DMSO的使用量。

研究结果表明，培养液中DMSO浓度为10%时，细胞生长抑制率近100%；1%浓度时抑制率为35%，即使是0.04%的浓度，DMSO对细胞的生长也有不利的影响。正是因为如此，细胞复苏后需要离心去除DMSO。

DMSO本身是很好的抑菌剂，DMSO浓度为8%时，可抑制92%的绿脓杆菌生长；浓度15%，能抑制98%的大肠杆菌及巨大芽孢杆菌的生长。2%的DMSO，就能抑制白色念珠菌和酵母菌等多种细菌的生长。 

DMSO保存

DMSO是怎样保存的，它的互溶性如何呢？DMSO与LDPE,HDPE，聚丙烯，PPCO，聚甲基戊烯，尼龙，teflon FEP完全互溶；与聚苯乙烯，ECTFE/ETFE中度互溶；与聚砜，flexible and rigid PVC tubing，聚碳酸脂不互溶。因此DMSO不能使用PS、PVC、PC材料的容器，而应该使用LDPE、HDPE、PP材料的容器。市场上包装 DMSO通常使用玻璃瓶或聚乙烯瓶（PE）进行包装。DMSO包装需要确保密封性良好，以避免DMSO挥发或受到污染。DMSO的储存温度应在室温下(15-25℃)或低温下(-20℃)保存。需要避免将DMSO暴露在高温、阳光直射或潮湿环境中。

实验室安全攸关人心，大家进入实验室务必认真阅读实验室手册，注意实验室设备安全，有任何疑问都可以向同事或师兄师姐及老师请教。

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