全 文 ：收稿日期:2008-01-21作者简介:邱莉(1973-),女(汉族),湖北武汉人 ,博士研究生, E-mail [email protected];邱峰(1967-),男(汉族), 辽宁瓦房店人 ,教授 ,博士 ,主要从事天然活性成分及其代谢转化的研究, Tel.024-23986463 , E-mail [email protected]。文章编号:1006-2858(2008)12-0956-04酸浆茎叶中的四甲基环己烯型单萜苷类化合物邱　莉 , 刘红霞 , 姜志虎 , 覃耿 土土土 , 陈丽霞 , 邱　峰(沈阳药科大学 中药学院 , 辽宁 沈阳 110016)摘要:目的 研究茄科植物酸浆[ Physalis alkekengi L.var.franchetii(Mast.)Makino] 茎叶的化学成分。方法 用体积分数为 60%的乙醇水溶液加热回流提取 , 提取液浓缩后用水混悬 , 依次用环己烷 、乙酸乙酯 、正丁醇萃取;将正丁醇层通过聚酰胺柱色谱 , Sephadex LH-20 柱色谱 、反相 ODS 开放柱色谱及反相制备 HPLC 等手段 , 共分离得到 4 个四甲基环己烯型单萜苷类(megastigmane gly co-sides)化合物;利用其理化性质和波谱学数据 , 鉴定化合物结构。结果 分离得到 4 个四甲基环己烯型单萜苷类化合物 ,分别鉴定为(6S , 9 R)-长寿花糖苷[ (6 S , 9 R)-roseoside , 1)] 、(6S , 9R)-长寿花糖苷[ (6 S , 9S)-ro seoside , 2] 、(6S , 9R)-3-氧-α-紫罗兰醇-β -D -吡喃葡萄糖苷[(6 R ,9 S)-3-oxo-α-ionol-β-D-glucopyrano side , 3] 、citroside A(4)。结论 4 个化合物均为首次从该属植物中分离得到。关键词:酸浆;四甲基环己烯型单萜苷;化学成分;结构鉴定中图分类号:R 932　　　文献标志码:A　　茄科酸浆属(Physal is)植物全世界约 120种 ,大多数分布于美洲热带及温带地区 ,少数分布于欧亚大陆及东南亚。我国有 5种 2变种 ,全部具有药用价值[ 1] 。其中酸浆 [ Physalis alkekengiL.var.f ranchet i(Mast.)Makino]的干燥宿萼或带果实的宿萼是 2005版《中华人民共和国药典》(一部)收录的常用中药 ,该药具有清热解毒 、利咽化痰 、利尿等作用 ,用于咽痛 、音哑 、痰热咳嗽 、小便不利;外治天疱疮 、湿疹[ 2] 。作者在对酸浆植物化学成分的系统研究中 ,已从酸浆宿萼中分离得到 4种主要的酸浆苦素类成分以及 8种黄酮类成分[ 3-4] ,进一步研究发现该植物含有丰富的四甲基环己烯型单萜苷类(megastigmane glycoside)化合物 ,并从酸浆茎叶的体积分数为 60%的乙醇水提取物的正丁醇层部位分离得到了 4个四甲基环己烯型单萜苷 ,通过理化数据和波谱学方法鉴定为(6S , 9R)-长寿花糖苷[(6S , 9R)-roseoside ,1] 、(6 S , 9R)-长寿花糖苷[(6S ,9 S)-roseoside ,2] 、(6S ,9R)-3-氧-α-紫罗兰醇-β -D -吡喃葡萄糖苷[(6R , 9S)-3-oxo-α-ionol-β-D-g lu-copy ranoside ,3] 、citroside A(4)。其中化合物4具有亚烯结构(-idene),上述 4个化合物均为首次从该属植物中分离得到 。国内外近年来对酸浆中抗炎抗菌活性物质的研究多集中在酸浆苦素类化合物[ 5-6] ,但鉴于有关四甲基环己烯型单萜苷类(megastigmane glycoside)化合物在抗炎活性方面的报道[ 7] ,作者推测上述四甲基环己烯型单萜苷类(megast igmane g ly coside)化合物也是酸浆抗炎活性的物质基础之一 。本文作者主要报道 4个四甲基环己烯型单萜苷类(megastigmane glycoside)化合物的分离和鉴定。化合物 1-4 的结构见图 1。Fig.1　Structures of compounds 1-41　仪器与材料Bruker esquire 2000离子阱质谱测定仪(德国Bruker 公司), Bruker ARX-300 、Bruker ARX-600(TM S 为内标物 ,德国 Bruker 公司),Waters600高效液相色谱仪(PDA996 检测器 , Millenni-DOI :10.14066/j.cnki.cn21-1349/r.2008.12.004um32色谱工作站 ,美国 Waters公司), PhenomsilC18反相分析色谱柱(250 mm×4.6 mm , 5 μm 美国 Phenomen Technology 公司), Phenomsil C18制备型反相色谱柱(250 mm ×10 mm ,美国 Phe-nomen Technology 公司), Jasso P -1020旋光测定仪(日本 Jasco 公司)。聚酰胺(100 ～ 180 μm ,上海万腾化工试剂有限公司),聚酰胺薄膜(10 cm×10 cm ,浙江省台州市路桥四甲生化塑料厂), Sephadex LH-20(美国Pharmacia 公司), ODS 填料(美国 Pharmacia 公司),反相 C18薄层色谱板(德国 Merck 公司),氘代试剂(德国 Merck公司),甲醇(色谱纯 ,天津市康科德科技有限公司),其他所用化学试剂(分析纯 ,天津市大茂化学试剂厂)。酸浆茎叶采集于黑龙江省依兰县 ,由沈阳药科大学中药学院孙启时教授鉴定为酸浆[ Physalis alkekengi L.var.f rancheti(Mast.)Makino] 。2　提取分离酸浆 (Physalis alkekengi L.var.f ranchet i(Mast.)Makino)茎叶(7 kg)粉碎后 ,用体积分数为60%的乙醇水溶液加热回流提取 2 次 ,每次1 h;合并提取液 ,回收乙醇 ,浓缩 ,用水混悬 ,依次用环己烷 、乙酸乙酯 、正丁醇萃取 3次;取正丁醇层 100 g 通过聚酰胺柱色谱 ,用甲醇-水梯度洗脱 ,水洗脱部分采用 Sephadex LH-20 柱色谱甲醇-水(体积比为 1∶1)洗脱 、ODS 开放柱色谱(甲醇-水梯度洗脱)及反相制备 HPLC(甲醇-水 ,体积比为 30∶70), 从中分离得到化合物 1(12.5 mg)、化合物 2(50.0 mg)、化合物 3(37.0 mg)、化合物 4(50.0 mg)。3　结构鉴定化合物 1:白色无定型粉末 , Molish 反应阳性 ,提示为糖苷类化合物 。UVλMeCNmax nm 236(logε3.84), [ α] 20D +65.8(c 0.11 , MeOH), CD(c0.20 ,MeOH):241.5(+68.9 mdeg)。 ESI-MS:m/ z 409([ M+Na] +)、795([ 2M +Na] +)、421.5([ M +Cl] -)、385([ M -H ] -)、431([ M +HCOO-] -),结合1H 、13C-NMR数据推测分子式为C19H30O8 。 1H-NMR(300 MHz , DMSO-d 6)显示4 个甲基信号 δ:0.91(3H , s , H-11)、0.91(3H , s ,H-12)、1.79(3H , s , H-13)和 1.16(3H ,d , J =6.4 Hz ,H-10), 2个偕偶的亚甲基质子信号 δ:2.41(1H , d , J =16.7 Hz , H-2a)和 2.03(1H , d , J =16.7 Hz , H-2b), 1 个糖端基质子信号 δ4.15(1H ,d , J =7.7 Hz),1个连氧次甲基氢信号δ4.31(1H ,m ,H-9),1个烯氢信号δ5.75(1H , s ,H-4),2个反式偶合的烯氢信号 δ:5.76(1H ,d , J =15.9Hz ,H-7)、5.74(1H , d , J =15.9 Hz , H-8),以及1组糖上的质子信号 δ:2.92 ～ 3.09(4H , m)、3.62(1H , dd , J =5.0 , 11.1 Hz , H-6′a)和 3.39(1H ,dd , J =5.0 ,11.1 Hz ,H-6′b)。化合物 1经酸水解 ,糖腈乙酸酯衍生化后通过气质分析 ,与标准糖的糖腈乙酸酯衍生物比对 ,检测出 D-Glc。根据糖端基质子信号的偶合常数推测苷键构型为β型 。13C-NMR(75 MHz , DMSO-d6)谱(见表 1)给出 1 个羰基信号 δ197.4 , 4 个烯碳信号 δ:125.7 、130.4 、133.4 、+68.9 mdeg 164.1 , 1个连氧季碳信号 δ77.9 , 1 个连氧次甲基碳信号 δ74.7 ,1个糖端基碳信号 δ:100.9以及 1组糖上的碳信号 δ:76.9 、76.9 、73.7 、70.1 、61.2。化合物 1的 CD谱在 241.5 nm处显示+68.9 mdeg的吸收 ,与文献[ 8]数据对比 ,确定其 6位为(S)构型 ,对比化合物 1 的理化性质和波谱数据与文献[ 8]报道的(6S , 9R)-roseoside 的数据一致 ,由此确定化合物 1为(6S , 9R)-roseoside ,即(6S , 7E ,9R)-6 ,9-二羟基-megstigman-4 ,7-二烯-3-酮-9-O -β-D -葡萄吡喃糖苷。化合物 2:白色无定型粉末 , Molish 反应阳性 ,提示为糖苷类化合物 。UVλMeCNmax nm 235(logε3.99), [ α] 20D +66.7(c 0.11 , MeOH), CD(c0.32 , MeOH):241(+82.3 mdeg)。 ESI-MS:m/ z 409([M +Na] +)、421.5([ M +Cl] -)、385([ M -H] -)、431([ M +HCOO-] -)。结合 1H 、13C-NMR数据推测分子式为 C19H30O8 。 1H-NMR(600 MHz , DMSO-d6)显示 4个甲基信号 δ:0.90(3H , s ,H-11)、0.92(3H , s ,H-12)、1.80(3H , s ,H-13)和 1.17(3H , d , J =6.4 Hz ,H-10), 2个偕偶的亚甲基质子信号 δ:2.54(1H , d , J =16.6Hz ,H-2a)和 2.04(1H ,d , J =16.6 Hz ,H-2b),1个糖端基质子信号 δ4.08(1H , d , J =7.8 Hz),1个连氧次甲基氢信号 δ4.42(1H , m ,H-9),1个烯氢信号 δ5.75(1H , s , H-4),2 个反式偶合的烯氢信号 δ:5.94(1H ,d , J =15.5 Hz ,H-7)和 δ5.74(1H ,dd , J =6.3 , 15.5 Hz ,H-8),以及 1组糖上的质子信号 δ2.92 ～ 3.03(4H , m)、3.63(1H ,dd , J =6.0 , 11.7 Hz , H-6′a)和 3.40(1H ,957第 12 期 邱　莉等:酸浆茎叶中的四甲基环己烯型单萜苷类化合物　　　dd , J =6.0 , 11.7 Hz ,H -6′b)。化合物 2经酸水解 ,糖腈乙酸酯衍生化后通过气质分析 ,与标准糖的糖腈乙酸酯衍生物比对 ,检测出 D-Glc。根据糖端基质子信号的偶合常数推测苷键构型为 β型。13C-NMR(75 MHz ,DMSO-d 6)谱(见表 1)给出1个羰基信号 δ197.8 ,4个烯碳信号 δ126.0 、131.9 、132.1 、164.2 , 1个连氧季碳信号 δ78.4 ,1个连氧次甲基碳信号 δ72.4 , 1个糖端基碳信号 δ100.4以及1组糖上的碳信号 δ77.6 、77.5 、73.7 、70.4 、61.5 。对比化合物 1 和化合物 2 的NMR数据发现二者具有相同的平面结构 ,化合物1 是化合物 2 的 9位立体异构体。根据文献[ 9]报道 , C-9的化学位移可以用来确定 9 位的立体构型 , 化合物 2 的C-9的化学位移为 δ72.4 ,相对于化合物 1 的C-9的化学位移(δ74.7)处于高场 ,故化合物 2中C-9的绝对构型为 S 。化合物 2 的 CD谱在 241 nm 处显示 +82.3 mdeg 的吸收 ,与文献[ 8]数据对比 ,确定其 6位为 S 构型 ,化合物 2的理化性质和波谱数据与文献[ 9]报道的(6 S , 9S)-roseoside 的数据一致 ,由此确定化合物 2 为(6S ,9 S)-roseoside ,即(6S ,7E ,9 S)-6 , 9-二羟基-megstigman-4 ,7-二烯-3-酮-9-O -D -葡萄吡喃糖苷 。化合物 3:白色无定型粉末 , Molish 反应阳性 ,提示为糖苷类化合物 。UVλMeCNmax nm 237(logε3.94), [ α] 20D +78.8(c 0.12 , MeOH), CD(c0.26 , MeOH):242(+126.6 mdeg)。 ESI-MS:m/ z 393([ M+Na] +)、763([ 2M +Na] +)、405.5([ M +Cl] -)、369([ M -H ] -)、415([ M +HCOO-] -)。结合 1H 、13C-NMR数据推测分子式为 C19H30O7 。1H-NMR(300 MHz , DMSO-d6)显示 4 个甲基信号 δ0.91(3H , s , H-11)、0.95(3H , s ,H-12)、1.88(3H , s , H-13)和 1.20(3H ,d , J =6.5 Hz ,H-10), 2个偕偶的亚甲基质子信号 δ2.39(1H , d , J =16.5 Hz , H-2a)和 1.95(1H ,d , J =16.5 Hz ,H-2b), 1个次甲基信号 δ2.62(1H ,d , J =9.4 Hz , H-6), 1个糖端基质子信号 δ4.11(1H , d , J =7.6 Hz),1个连氧次甲基氢信号 δ4.36(1H , m , H-9), 1 个烯氢信号 δ5.81(1H , s , H-4), 2 个反式偶合的烯氢信号 δ5.74(1H , dd , J =9.4 , 15.3 Hz , H-7)和 δ5.51(1H ,dd , J =6.5 , 15.3 Hz , H-8),以及 1 组糖上的质子信号 δ2.92 ～ 3.03(4H , m)、3.64(1H ,dd ,J =5.8 , 11.5 Hz , H -6′a)和 3.42(1H , dd , J =5.8 , 11.5 Hz ,H-6′b)。化合物 3经酸水解 ,糖腈乙酸酯衍生化后通过气质分析 ,与标准糖的糖腈乙酸酯衍生物比对 ,检测出 D-Glc 。根据糖端基质子信号的偶合常数推测苷键构型为 β 型。13C-NMR(75 MHz , DMSO-d 6)谱(见表 1)给出1个羰基信号 δ198.0 , 4 个烯碳信号 δ124.9 、129.0 、135.2 、161.9 , 1 个连氧次甲基碳信号 δ72.3 ,1个糖端基碳信号 δ100.1 以及 1 组糖上的碳信号 δ77.2 、77.1 、73.3 、70.1 、61.4。化合物3的 CD谱在 242 nm 处显示 +126.6 mdeg 的吸收 ,与文献[ 10]数据对比 ,确定其 6位为(R)构型。化合物 3的理化性质和波谱数据与文献[ 10]报道的(6R ,9S)-3-oxo-α-ionol-β-D-glucopyranoside的数据一致 ,由此确定化合物 3为(6S ,9R)-3-氧-α-紫罗兰醇-β -D-吡喃葡萄糖苷[(6R ,9S)-3-oxo-α-ionol-β-D-glucopyranoside] 。化合物 4:白色无定型粉末 , Molish 反应阳性 ,提示为糖苷类化合物 。UVλMeCNmax nm 230(logε4.12), 204(logε4.13), [ α] 20D -95.4(c 0.14 ,MeOH)。ESI-MS:m / z 409([ M +Na] +)、795([ 2M +Na] +)、421.5([ M +Cl] -)、431([ M +HCOO-] -)。结合1H 、13C-NMR数据推断分子式为C19H30O8 。 1H-NMR(600 MHz , DMSO-d 6)显示 4 个甲基信号 δ2.12(3H , s , H-10)、1.05(3H , s ,H-11)、1.29(3H , s , H-12)和 1.33(3H ,s ,H-13), 2 对偕偶的亚甲基质子信号 δ1.79(1H ,br d , J =9 Hz , H-2a)和 1.18(1H , dd , J =9 ,6.5 Hz , H-2b)、2.38(1H , br d , J =11.4 Hz ,H-4a)和 δ1.21(1H , dd , J =11.4 , 6.5 Hz ,H-4b), 1个糖端基质子信号 δ:4.35(1H , d , J =7.7Hz),1个连氧次甲基氢信号 δ4.15(1H , m , W 1/ 2=21.5 Hz ,H-3), 1 个烯氢信号 δ5.86(1H , s ,H-8),以及 1组糖上的质子信号 δ2.92(1H ,m ,H-2′)、3.15(1H , m , H-3′)、3.01(1H , m , H-4′)、3.05 (1H ,m ,H-5′)、3.62(1H , dd , J =5.0 ,11.5 Hz , H-6′a)和 3.36(1H , dd , J =5.0 , 11.5Hz ,H-6′b)。化合物 4经酸水解 ,糖腈乙酸酯衍生化后通过气质分析 ,与标准糖的糖腈乙酸酯衍生物比对 ,检测出 D-Glc。根据糖端基质子信号的偶合常数推测苷键构型为 β 型。 13C-NMR(75MHz ,DMSO-d6)谱(见表 1)给出 4个 sp2杂化的碳信号 δ117.5 、99.9 、197.7、210.8 ,1个连氧次甲基碳信号 δ61.2 ,1个连接在叔碳上的糖端基碳信号δ97.0 以及1组糖上的碳信号 δ77.4 、76.8 、958 　　　沈　阳　药　科　大　学　学　报 第 25卷73.8 、70.3 、61.2。化合物 4的H-3质子化学位移为:δ4.15(1H ,m , W 1/ 2=21.5 Hz),与文献[ 11]数据对比 ,确定 H-3为 β 构型 ,化合物 4的理化性质和波谱数据与文献[ 8 , 11-12]报道的 ci tro-side A的数据一致 ,由此确定化合物 4为 ci trosideA ,即(3S , 5R , 8R)-3 , 5 -二羟基 -megastig-mane-6 , 7-亚烯-9-酮-5-O -β-D -葡萄吡喃糖苷 。其1H-NMR和13C-NMR数据归属是经2D-NMR(HSQC ,HMBC)分析确定的。Table 1　13C-NMR data of compounds 1-4No. 1 2 3 41 41.0 41.4 35.8 35.82 49.4 49.8 47.3 49.33 197.4 197.8 198.0 61.24 125.7 126.0 124.9 46.15 164.1 164.2 161.9 77.16 77.9 78.4 54.8 117.67 130.4 131.9 129.0 210.78 133.4 132.1 135.2 99.99 74.7 72.4 72.3 197.710 20.9 22.5 22.1 26.411 24.1 24.5 27.5 31.912 23.1 23.6 26.8 29.213 18.9 19.1 23.0 26.5G lc1′ 100.9 100.4 100.1 97.02′ 73.7 73.7 73.3 73.83′ 76.9 77.5 77.1 77.44′ 70.1 70.4 70.1 70.35′ 76.9 77.6 77.2 76.76′ 61.2 61.5 61.4 61.2参考文献:[ 1 ] 许亮.茄科酸浆属两种药用植物生药学研究[ D] .沈阳:辽宁中医学院 , 2004:3.[ 2 ] 国家药典委员会.中华人民共和国药典:一部[ M ] .北京:化学工业出版社 , 2005:250-251.[ 3 ] 赵倩 ,邱莉 , 邱峰 ,等.酸浆宿萼的化学成分[ J] .沈阳药科大学学报 , 2006 , 23(3):151-155.[ 4 ] 邱莉 ,姜志虎 , 邱峰 , 等.酸浆宿萼中的黄酮苷类化合物[ J] .沈阳药科大学学报 , 2007 , 24(12):744 -747.[ 5 ] MELISSA T G S , SONIA M S , TEREZINHAGFMB , et al.Studies on antimicrobial activity , in vitro , ofPhysalis angulata 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ruit[ J] .Phy tochemistry , 1992 , 31(5):1649 -1652.(下转至第 1006页)959第 12 期 邱　莉等:酸浆茎叶中的四甲基环己烯型单萜苷类化合物　　　flow cy tometric assay PI stained A549 cells af ter acted w ith active samples for 32 h.Strain ident if icationsw ere based on the colonial morphology , mycelial mo rphology , biochemical properties and 16S rDNA se-quence.Results and Conclusions Sixteen strains w ere screened out f rom 350 soil actinomycetes st rains in thefirst round which had the distinct activi ties of inhibiting g row th of A549 and HGC-27 cells.One activestrain w as conf irmed its anti-tumo r activi ty , named 1070 , in the second round.FCM results show ed sub-diploid spike of A549 cells wi th the ratio of 32.07%when treated with 500 mg·L-1 sample fo r 32h.Colo-nial morphology and mycelial mo rphology revealed st rain 1070 belonging to Streptomyces sp., further re-sults of biochemist ry properties , 16SrRNA sequences and phylogenetic analysis illuminated st rain 1070should be identified as Streptomyces capi ll ispiralis.Key words:anti-tumor;MTT assay;flow cryometry;screening;st rain identification(上接第 959页)[ 11] UMEHARA K ,HATTORI I ,MIYASE T , et al.S tud-ies on the constituents of leaves of citrus unshiu marcov[ J] .Chem Pharm Bull , 1988 , 36(12):5004-5008.[ 12] VILLE T E D , HURSTHOUSE M B , RUSSELL SW , et al.Absolute configuration of carotenoids[ J] ,Chemical Communications , 1969 , 34(19):1311 -1312.Megastigmane glucosides from the stems and leavesof the Physalis alkekengi L.var.franchetiQ IU Li , LIU Hong-xia , JIANG Zhi-hu , QIN Geng-yao , CHEN Li-xia , Q IU Feng(School of Tradit ional Chinese Materia Medica , Shenyang Pharmaceut ical University , Shenyang 　110016 , China)Abstract:Objective To study the chemical constituents from stems and leave of Physalis alkekengi L.var.f rancheti(Mast.)Makino.Methods The leaves and stems of Physalis alkekengi L .var.f rancheti(Mast.)Makino w ere ex tracted w ith EtOH-H2O(V∶V =60∶40).The ext ract w as partitioned with n-hexane ,EtOAc and n-BuOH , respectively.The n-BuOH layer w as subjected to column chromatog raphy overpolyamide ,Sephadex LH-20 , ODS and RP-PHPLC stepw isely to give four megastigmane glucosides.Thespectral analy ses and physicochemical characters w ere used to identify the structures of the compounds.Re-sults All of the four compounds w ere identified as megastigmane g lucosides.They are(6S , 9R)-roseoside(1),(6S ,9S)-roseoside(2),(6R , 9S)-3-oxo-α-ionol-β-D-glucopy ranoside(3)and cit roside A(4).Conclu-sions Compounds 1-4 are isolated from Physalis genus(Solanaceae)fo r the first time.Key words:Physalis alkekengi L.var.f rancheti;megastigmane glycoside;chemical constituents;st ruc-tural determination1006 　　　沈　阳　药　科　大　学　学　报 第 25卷