1.3.3特点：该模型简单易行，药物购买容易，造模时间 短，大鼠肝纤维化模型成功率高且形成相对稳定，中断药 物后肝纤维化仍有保持。但TAA的毒性大，易挥发，实验 操作过程中应加强个人防护。

1.4乙醇诱导的肝纤维化模型

1.4. 1作用机理：进人肝内的酒精在乙醇脱氢酶和微粒体 乙醇氧化酶系的作用下转变为乙醛，再转变为乙酸。后一 反应使辅酶i (nad)转变为还原型辅酶i (nadh),导致 nadh对nad比值增高的效应，从而肝内脂肪酸合成增加， 血窦的氧消耗增加，当其增多超过肝脏的处理能力就形成 酒精肝，最终形成大鼠肝纤维化。

1.4.2方法：56°白酒每天灌胃2次共16周，同时以10% (v/v)白酒为唯一饮料。第1 ~3周末灌胃量为每次8 ml/ kg，第4~7周末灌胃量为每次10ml/kg，第8~16周末灌胃量为每次12 ml/kg[12_13]。

1.4.3特点：酒精引起肝纤维化的实验结果表明，大鼠肝 纤维化的程度与实验时间的长短成正相关。乙醇诱导的肝 纤维化模型一般用于酒精性肝病的研究，但其形成纤维化 的程度难以控制。

1. 5实验性免疫诱导肝纤维化模型 1.5.1作用机理：该模型形成机制是异种蛋白或异种血清 引发的机体III型变态反应，主要在门脉汇管区形成免疫复 合物沉积，而引起局部炎症反应，进一步刺激胶原的增生 而形成肝纤维化。

1.5.2方法：李晓荟等通过腹腔注射猪血清建立免疫损伤 性大鼠肝纤维化模型，给SD大鼠腹腔注射猪血清每只注 射0.5 ml,每周2次，造模时间为12周，可见肝组织区内 肝细胞变性，坏死，炎性细胞浸润，汇管区及小叶间纤维 组织增生，纤维化模型形成率100%，持续时间120天以 上[1415]。此外，还可采用动物血清白蛋白如牛血清白蛋白 致免疫损伤性肝纤维化动物模型。

1.5.3特点：由于此类模型是一种免疫性损伤，造成的肝 纤维化与临床上的慢性肝炎所致肝纤维化在发生机制上更 加接近，形成较稳定，对动物器官损伤较轻，持续时间长， 肝纤维化无桥状坏死。在研究肝纤维化发生机制、早期诊 断以及评价药物疗效等方面应用较多。但该模型自愈倾向 较大，造模周期长，死亡率较高。

1.6砷暴露法诱导肝纤维化模型

1.6. 1作用机理：无机砷是一种已知的毒物和人类致癌 物。砷及其代谢产物对肝细胞的毒性、DNA损伤及砷诱导 的脂质过氧化进程中产生多种自由基和非自由基产物，可 引起细胞功能紊乱或直接攻击细胞造成损伤，反复肝细胞 损伤、修复，最终向肝纤维化发展。研究表明砷含量及砷 致肝脏损伤程度与砷浓度及暴露时间呈正相关。随砷暴露 时间的延长，大鼠肝脏肝组织炎症细胞浸润和肝细胞变性、 坏死逐渐加重，并伴有纤维组织增生进行性增多，形成纤维 间隔，最终破坏肝小叶结构，形成肝纤维化。

1.6.2方法：将砷与水稀释至一定浓度，经口服对SD/ wistar大鼠进行给药造模。国内大多采用含砷浓度3. 2 mg/ L的饮用水方法诱导大鼠肝纤维化。根据给药剂量的不同， 造模时间为12 ~ 16周不等[IW7]。

1.6.3特点：水砷暴露所引起的肝纤维化动物模型，造模 周期较长，4个月后才见少许肝纤维化，实验过程中大鼠 死亡率较高。而且砷是一种已知人类致癌物，实验时应注 意个人防护。

1.7复合法：复合法通常采用CC】4、乙醇与高脂饲料联合 造模[18]，CC14与乙醇联合造模[19]，白酒-卩比唑-植物油联合 造模等，均获得较好的效果。

1.7.1作用机理：鉴于单因素建模的建模周期长，成模比 例低，联合几种方法的作用机理，复合建模方法可以使几种机理一起作用，达到建模时间短、重复高等特点。1.7.2方法：柯尊平等》«应用CC14、乙醇与高脂饲料联 合造模法给予高脂低蛋白饲料（89. 5%玉米粉，0.5%胆固 醇，10%渚油），并饮用5% ~ 10%乙醇溶液（头3天5% 乙醇，以后10%乙醇）。1周后首次皮下注射40%0(：14橄 榄油0.5m]/100g，以后每周2次（周1、2)注射0.3ral/ 1〇〇 g,连续3周建模。陈江等[19]应用CC14与乙醇联合造 模，对大鼠进行皮下注射40% CC14葵花仔油溶液，首次5 ml/kg,以后3ml/kg、10ml/kg,同时灌胃30%乙醇，连 续6周建模。李丰衣等应用白酒-吡唑-植物油联合法造 模，用“白酒-吡唑-植物油”混合液灌胃，每只大鼠灌胃 白酒 4_ 8 g/ ( kg • d)、P比唑 24 mg/ ( kg • d)、玉米油 2 mL/ (kg • d)的混合液，灌胃16周。在灌胃白酒混合物 的同时饲喂高脂饲料（基础饲料-胆固醇-猪大油=79:1: 20)。

1.7.3特点：采用CCl4、高脂食物、酒精等复合因素制作 肝纤维化模型，多因素造模由于成功率更高、形成时间更 短、模型更加稳定、尤其是与肝纤维化实际病变过程具有 一定的相似性。能更准确模拟自然生活环境。

2检测肝纤维化的方法

肝纤维化的诊断主要依赖于病理学的检査，但在临床 上肝穿不能为大多数患者所能接受。尽管目前检测肝纤维 化的指标很多，但各个指标的差异性较大，且没有一个指 标可以代替病理学检查。故此，我们常用联合多种检测的 办法来进行实验性大鼠肝纤维化的评估。2.1 —般检测方法：一般情况：观察大鼠一般症状和体 征：包括生长发育状况、死亡情况、精神状况、活动状况、 饮水有无异常、食欲、毛色、体重变化、大便等。大鼠肝 脏大体：肝脏大小、外形、质地、色泽、肝脏体质播[5,10-19]2.2血清检测方法：比色法检测血清中ALT、AST、ALP、 TBIL、ALB、SOD、MDA、GSH-Px、TP、Alb、内毒素、 ALr、LDH和NO水平放免法测定血清狀、1^、1¥- C、PCffi、GH、IGF-1和IGFBP-3的含量w。双抗夹心酶 联免疫吸附实验（ELISA)法测定血清中Leptin和TGF-pi 含量等。

2.3肝脏病理形态学变化：肝组织常规脱水、包埋、切片 常规做HE染色，观察肝组织病理学改变[2〇]; Masson染色 用半定量标准判断胶原纤维增生程度[16’18]。天狼猩红染色 后I型、m型胶原纤维胶原纤维呈红色，其余组织呈黄 色[8]。运用lmage-proplus5. 0图象分析软件半定量计数肝组 织胶原面积，每组随机取5个视野，通过比较各组肝组织 的纤维化指数（FI)值评价肝纤维化程度。FI =纤维染色 区面积/整个视野面积x 100% ,最后进行评估。

免疫组织化学染色检测指标：肝组织a-SMA，TGF-pl， TNF-a、PDGF、Ki^67、MMP-2、MMP-9、MMP-13、TIMP-1、TIMP-2、MT、OPN、CTGF等蛋白的表达[W9]。阳性区 域显示棕色，运用Image-prDplusS. 0图象分析软件半定量计 数肝组织蛋白表达的面积，每组织随机取5个视野，通过 比较各组肝组织的蛋白表达指数（FI)值评价肝纤维化程 度。FI =阳性染色区面积/整个视野面积x 100%，最后进 行评估。

2.4其他细胞生物学方法：制备肝勻浆，测定肝组织Hyp 和NO含量。免疫印迹法（Western blotting)检测肝组织 Fas、caspase-8 A caspase-3 ^ MMP-9、TIMP-1 ^ TIMP-2 ^ PPAR7、NF-KB蛋白表达[6>18]。RT-PCR法检测肝组织 ALB mRNA、IGF-1 mRNA 和 IGFBP-3 mRNA、PPAR^niRNA、 NF-kB mRNA 含量[l6]。

2.5无创影像学检查

2.5.1 B超：普通二维B超和彩色多普勒超声对早期肝纤 维化的诊断并不敏感也没有特异性，特别是对于早期肝纤 维的诊断，故此需应用特殊的超声技术来诊断肝纤维。 2.5.2超声造影（CEUS):经大鼠尾静脉以团注方式注射 0.06ml微泡混悬液，后推注1.5ml生理盐水。选择肝中叶 的肝实质为感兴趣区（R0I),绘制相应的时间-强度曲线 (TIC),并得出各项定量参数，如：强度增量（al)、峰值 减半速率（a2)、峰值强度（P1)、达峰时间（TTP)、造影 剂到达时间（AT)、曲线下面积（AUC)、肝动静脉渡越时 间（HA-HVTT)等。a2反映了曲线下降过程的快慢程度， AT为从造影剂注入到开始显示的时间，TTP表示从造影剂 注人到达峰值时的时间，PI为曲线峰值强度，al为峰值强 度与基础强度的差值，HA-HVTT为肝动脉、肝静脉分别开 始显影的时间差。利用以上数据分析肝实质时间-强度曲线 及其参数，评估肝脏分级[21#。超声弹性成像是一种用瞬时弹性成像用来测量感兴趣 区域的平均弹性模量，使用高频探头914,频率9MHz，探 头向肝脏组织发出声脉冲，声脉冲在组织内传播并产生剪 切波。系统发出的探测脉冲检测剪切波进而测量其波速并 反映组织的硬度。超声弹性成像运用弹性硬度半定量分析 (eSietouch)及声触诊组织量化技术（VTQ)来诊断肝脏 纤维化程度。超声弹性成像作为一种无创、快速、价廉、 可动态评价肝脏纤维化程度的检查方法，有其独特的优势， 值得未来在临床上推广[23]。

2.5.3 CT:近年来出现了 CT灌注成像用于评价肝纤维化 的报道。所谓CTP是指在静脉注射造影剂的同时对选定的 层面进行连续不断的扫描，以获得该层面内每一像素的时 间一密度曲线，利用不同的数学模型计算出组织内血管的 血流量、血容量、造影剂平均通过时间、达到峰值的时间 等参数，通过软件对其进行图像重组和伪彩染色，得到血 流灌注图、血流容积图、造影剂平均通过时间图、造影剂 峰值时间图等，以此来全面评价组织器官的灌注状态。Ma- teme等[24]利用高低对比剂团注法通过肝细胞微血管渗透性2. 5.4 MRI: Salameh等[25]对10只腹腔注射CC14诱导的 肝纤维化大鼠和5只正常大鼠进行了 MRE检测，他们将 200 MHz的纵向波向肝脏发射，肝脏波传播在1. 5 T使用 相位同步平面-回波序列进行分析。通过Voigt模型获得的 肝脏粘弹性参数，与纤维化面积的自动图像分析、肝脏羟 脯氨酸含量相关。剪切粘弹性参数和自动分析仪获得的纤 维化面积高度相关；剪切粘弹性参数与羟脯氨酸存在中度 相关。在这些研究中发现弹性参数与整个肝脏中肝纤维化 的绝对值以及羟脯氨酸含量存在良好的相关性。

大鼠经尾静脉注射Mn-DPDP对比剂，首先对肝脏进行 MRI定量分析，再对肝脏的形态变化：各叶比例大小，肝 裂有无增宽；强化形式：均匀、基本均匀和不均匀；肝内 血管显示：清晰和不清晰；周围伪影：包括呼吸移动和动 物体位置移动伪影图像等进行MRI定性分析评价指 标[酬。

由于肝纤维的发生发展变化无特殊的临床症状和病理 体征，利用常规HE染色、多种病理染色、各种肝组织细 胞的组织化学、免疫组化甚至原位杂交技术和结合各种影 像学技术来提供肝脏定量和定性的资料来进行综合评估。 人类发生肝纤维化的病因很多，在国内以慢性乙型病毒性 肝炎导致的肝纤维化最常见，在国外则以酒精性肝纤维化 最常见。随着对肝纤维化相关实验的研究，现时有多种不 同的方法来建立动物肝纤维化模型，但其制作方法与人肝 纤维化的发生及病程的发展过程还是具有相当大的差异。 迄今为止，仍没有一种与人类肝纤维化发生机制机理完全 一致的建模方法，也没有一种非常准确、能完全替代病理 金标准检测的肝纤维化评估方法。理想的肝纤维化模型建 立及理想的肝纤维化的评估方法，是研究肝纤维化实验中 的一个重点与难点，尚需我们进一步深入探讨及研究。

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