抗性淀粉及总淀粉测定方法

采用

Megazyme

抗性淀粉试剂盒法，测定方法见试剂盒说明书（下附）

原理（

AOAC

法

2002.02 ;AACC

法

32-40

）

抗性淀粉的测定方法：

样品使用α

-

胰淀粉酶和淀粉葡糖苷酶（

AMG

）

37

℃振荡水浴

孵育

16

小时，在这期间，通过两种酶的联合作用，非抗性淀粉被溶解，水解成

D-

葡萄糖，

孵育结束后，加入等体积的乙醇或工业甲基化酒精

（

IMS,

变性乙醇）终止反应。离心上述溶

液，收集上清勿弃，底部残留絮状团即为样品中的

RS

，用含水的

IMS

或乙醇（

50%v/v

）洗

涤絮状团，

洗涤后离心，

再重复一次洗涤离心，收集离心后获得的上清，与之前收集的上清

混合。小心倒出试管残留的液体，将絮状团置于冰水浴中，加入

2M KOH

溶解，溶解的同时

用磁力搅拌机剧烈搅拌。

用醋酸盐缓冲液将这个溶液调至中性，

用

AMG

将淀粉定量水解成葡

萄糖。

D-

葡萄糖用葡糖氧化酶

/

过氧化物酶试剂（

GOPOD

）测定，这也是对样品中

RS

含量的

测定。非抗性淀粉（可溶性淀粉）的测定可通过集中的上清液并定容至

100mL

，再用

GOPOD

测定

D-

葡萄糖完成。

总淀粉测定方法：即抗性淀粉与非抗性淀粉总和。

抗性淀粉检测试剂盒

K-RSTAR 

（

100

次分析）

应用性和精确性

这个方法需要样品中

RS

含量多于

2% w/w

。如

RS

含量多于

2% w/w

，常规标准误差为

±

5%

。少于

2% w/w RS

的误差更高。

试剂盒

瓶子

1

：淀粉葡糖苷酶

AMG

，

12 mL

，

3300U/ mL

，条件为

pH4.5

，

40

℃下，底物为可溶

性淀粉，

[

单位或为

200U/mL

，

条件为

pH4.5

，

40

℃下，

底物为对硝基苯基β

-

麦芽糖苷

]

。

AMG

溶液应完全没有可检测到的游离

D-

葡萄糖。

4

℃下稳定性

> 3

年。

瓶子

2

：α

-

胰淀粉酶

(

胰酶，

10g

，

3Ceralpha U/mg)

。

4

℃下稳定性

> 3

年。

瓶子

3

：

GOPOD 

试剂缓冲液。磷酸钾缓冲液（

1M

，

pH7.4

）

，对羟基苯甲酸（

0.22M

）