Dynabead细胞分离与扩增支持

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Dynabead细胞分离与扩增支持

2023-08-14 11:56| 来源: 网络整理| 查看: 265

天然情况下,细胞表面的TCR-CD3复合物会持续内吞和重新插入胞膜。当Dynabeads™ 磁珠与培养细胞上的CD3/CD28相结合时,TCR-CD3复合物即会发生内吞并随之降解。当这一进程发生时,胞膜表面不再有磁珠结合的靶点,因此磁珠就被释放到培养基中。磁珠—细胞聚集物能够存在3-4天,直至磁珠从细胞上脱落。

T细胞受体(TCR-CD3)复合物由数个不同的亚基所组成,其中TCR的可变免疫球蛋白区(V)与配体间发生结合。CD3亚基和TCR的胞内尾部会与胞浆信号蛋白发生相互作用。复合物的胞内部分存在有几种内吞信号。

组成型内吞(无配体结合条件):

我们从文献中得知,约有20种基于酪氨酸的内吞模体和2种双亮氨酸模体能够在无配体结合的条件下持续介导TCR-CD3复合物的胞膜内吞过程。再循环过程约为100分钟(从胞膜运送至早期内涵体,再返回胞膜),10次循环之后TCR-CD3复合物会靶向进入溶酶体中的降解途径。

诱导性内吞(存在配体结合条件):

TCR-CD3复合物的配体依赖型内吞过程是由泛素介导的。一旦结合了配体,泛素即与复合物胞内尾部的某一氨基酸发生偶联,从而导致复合物的网格蛋白依赖型内吞及随后的溶酶体降解过程(内吞在2小时左右到达平台期 (Nature 375:148 (1995)) 

当磁珠与CD3-CD28结合时,复合物将发生主动的内吞和降解过程。当这一进程发生时,胞膜表面不再有磁珠结合的靶点,因此磁珠就被释放到培养基中。如果不将磁珠从培养基中移除,它们则会在TCR-CD3复合物重新出现在胞膜表面时再次与其结合。



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