免疫共沉淀磁珠 |
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第 1 步:抗体与磁珠结合 抗体与磁珠结合。Dynabeads磁珠预先包被Protein A、Protein G、抗鼠IgG或抗兔IgG抗体,基于快速动力学,加入的抗体仅需10分钟即可结合到磁珠上。生物素化抗体也可用于与链霉亲和素偶联的Dynabeads结合。在磁力架上对磁珠进行一次清洗,以去除未结合的抗体。 第 2 步:将样品加到磁珠中将样品加到磁珠中。将含有蛋白质的样品掺入到结合抗体洗涤过的磁珠中,再孵育10分钟以结合目标靶蛋白。如果蛋白质是低丰度或低亲和力的,可延长孵育时间至1小时或过夜孵育;但是,孵育10分钟通常已足够。 第 3 步:清洗蛋白质结合的磁珠清洗蛋白质结合的磁珠。为确保结合的目标蛋白保持高纯度,应使用缓冲液对结合在磁力架上的磁珠洗涤2-4次,以去除所有未结合的蛋白。高效的分离过程确保高信噪比。 第 4 步:洗脱蛋白质洗脱蛋白质。如有需要,可使用温和的洗脱程序或变性洗脱程序将蛋白质从磁珠上洗脱(详见下文的洗脱说明)。 |
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