① 磁珠标记：样品与磁珠孵育15min左右；

② 阴性组分先行流出：孵育后的样品过柱处理，标记磁珠的细胞在磁场的作用下吸附到MACS分选柱子上，没有被标记的细胞（阴性组分）先行流到试管中；

③ 洗脱阳性组分：把MACS分选柱子从磁分选器上拿下来，这时磁珠是没有磁力的，故洗脱获得阳性组分，收集后用于做后续实验。

实例：从人的外周血PBMC中采用MACS磁珠分选CD14阳性细胞，分选后经流式检测，阳性组分细胞百分比为99.8%。

（2）有柱式分选-去除分选/阴性分选（磁珠标记的细胞为非目的细胞）

① 磁珠标记：非目的细胞被生物素化的抗体混合物标记，然后使用抗生素MACS微珠进行磁性标记；

②阳性组分先行流出：孵育后的样品过柱处理，标记磁珠的细胞在磁场的作用下吸附到MACS分选柱子上，没有被标记的细胞（目的细胞）先行流到试管中，收集后用于做后续实验。

实例：A、B是从小鼠的脾细胞中采用MACS磁珠分选CD4阳性细胞，分选后经流式检测，细胞群比较单一，阳性组分细胞（CD4+ cell）百分比为98.3%；C、D是从小鼠的脾细胞中采用MACS磁珠分选CD8阳性细胞，分选后经流式检测，细胞群比较单一，阳性组分细胞（CD8+ cell）百分比为98.7%。

（3）多重分选策略-获得多参数细胞

一般是先“阴性分选”再“阳性分选”

实例：A图是阴性分选富集CD4细胞，B图是在A图的基础上通过阳性分选富集CD4+CD25+双阳性细胞。

（4）血磁珠分选技术

MACSxpress技术可以直接从全血中用去除分选的方法分离到目的细胞，不需要ficoll离心和裂解红细胞。MACSxpress系统包括分选试剂、混匀器和分选器，其中，分选器不太一样，具有很好的兼容性，5ml，15ml和50ml的离心管都能使用。

整个操作流程比较简单：

①向15ml离心管中加入4-8ml的全血，然后加入MACSxpress分选试剂；

②然后用混匀器室温匀混5min；

③样品在分选器中静置15min；

④用移液器收集上清中的目的细胞。

实例：从全血中分选CD138,A图是分选前流式检测图，CD138阳性细胞群的含量很低，B图是分选后CD138的流式检测图，阳性细胞群比例很高。

三

MACS分选技术在肿瘤研究中的应用

（1）从小鼠移植瘤分选人的肿瘤细胞

将移植瘤制成单细胞悬液，采用阴性分选，获取人的肿瘤细胞，用于后续的实验（培养或测序等），A图是分选前流式检测结果图，横坐标是小鼠标记的一个marker磁珠，纵坐标是人的肿瘤细胞标记的marker磁珠；B图是磁珠未标记的目的细胞（人的肿瘤细胞）的流式检测图，可以看到细胞群单一，比例高；C图是磁珠标记的非目的细胞的流式检测图，基本上不含有目的细胞。

（2）从小鼠乳腺癌中分选肿瘤免疫细胞/肿瘤浸润的淋巴细胞（TILs）

将组织制成单细胞悬液，采用阳性分选，获取肿瘤免疫细胞（TILs），用于后续的实验，A图是分选前流式检测结果图，横坐标CD31-PE是内皮细胞标记的一个marker磁珠，纵坐标CD45是针对TILs标记的marker磁珠，可以看到CD45阳性细胞群的比例远不如CD45阴性细胞群的比例；B图是先行流出的未标记磁珠的非目的细胞的流式检测图，可以看到细胞群单一，均为内皮细胞；C图是磁珠标记的目的细胞（肿瘤免疫细胞）的流式检测图，可以看到，分选后大部分都是CD45阳性细胞群。

四

分选中常见问题

好了，今天小编给大家详细的介绍了磁珠分选的原理及应用，大家看过之后，应该会对磁珠分选有一定的了解，万一实验中碰到细胞分选的问题，不至于束手无策。

征 稿 启 事

「医学方」现正式向粉丝们公开征稿！内容须原创首发，与科研相关，一经采用，会奉上丰厚稿酬（300-2000元），详情请戳。

“医学方”始终致力于服务“医学人”，将最前沿、最有价值的临床、科研原创文章推送给各位临床医师、科研人员。返回搜狐，查看更多