常见多功能型分离液的配置方法 |
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OptiPrep™是Serumwerk Bernburg AG的一款多功能分离液,Serumwerk Bernburg成立于1954年,是一家现代化的、专门的生产商和服务商。OptiPrep生产、包装、发布严格按照GMP和ISO13485标准执行。
OptiPrep OptiPrep™是Serumwerk Bernburg AG的一款多功能分离液,其主要成分是60%碘克沙醇。密度为1.32 g/ml,可以用来分离多种种属、以及多种细胞、病毒、蛋白质、核酸等不同颗粒。OptiPrep不含多糖,对靶细胞无毒副作用,且内毒素含量<0.13EU/ml,远低于欧洲标准(1EU/ml)。
配制不同密度的OptiPrep: 使用密度溶液的配制方法,是基于使用0.85% (w/v) NaCl, 10 mM Tricine-NaOH, pH 7.4作为细胞悬浮培养基。为了使溶液在任何梯度下都保持浓度恒定,首先将4体积的OptiPrep™与2体积的溶液A (3倍浓度的缓冲液) 混合,来制备40% (w/v)的碘克沙醇工作溶液(WS)。然后,使用溶液B进一步稀释碘克沙醇工作溶液,以获得适当密度的梯度溶液,常见的密度配制见表1。 ![]() ![]() 注:HEPES/Tricine可以被其它有机缓冲液替代。如果溶液B中需要添加低浓度(1-2mM)的其它物质,如Mg2+或Ca2+,可以在溶液A也添加3-6 mM,以保持其在梯度中不变,如果不需要维持溶液恒定或二价阳离子浓度恒定,OptiPrep™可以直接用溶液B稀释(含有或不含低浓度的二价阳离子),所获得的梯度溶液的密度和折射率与表1相比可能会有微小的差异,所有梯度溶液的渗透压都在285-305 mOsm范围内。
PS:使用等渗盐溶液和培养基配制、使用含血清的培养基配制方法请参考往期文章: OptiPrep™的应用——不同密度梯度溶液的配制(关注下方“达科为生物城”公众号)
OptiPrep渗透压(约为290 mOsm/kgH2O)与血浆渗透压(约为300mOsm/kgH2O)相近,较少考虑平衡渗透压,在使用相同稀释溶液的情况下,分离液密度与碘克沙醇的百分比成正比。 ![]() Percoll Percoll是一种包有乙烯吡咯烷酮——polyvinylpyrrolidone (PVP)的硅胶颗粒的水溶液。渗透压很低( |
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