（一）病原体检测

包括病原体培养、病原体抗原检测、核酸（DNA或RNA）检测等。

1．病原体检测常用方法与评价：

急性感染期，取血液、羊水、尿液、唾液、疱疹液、脑脊液等样本，进行TORCH病原体培养、抗原检测、核酸检测，阳性检测结果是判断特定病原体急性感染最直接的证据。这些基于病原体样本的检测方法（包括样本取材）与病原体复制特点、潜伏或定植位置等特性有关。其中，病原体培养和病原体抗原检测成本高、费时、费力、周期长，且对实验室及操作人员专业程度要求较高，临床应用较少；核酸检测（比如PCR方法）灵敏度高、特异性好，可快速、高通量检测，是目前临床病原体检测的首选方法。由于原发感染和复发感染均可检测到病原体存在，所以样本中检测出病原体不能区分原发感染和复发感染。

2．胎儿宫内感染确诊方法：

羊水PCR检测常用于胎儿宫内感染的诊断，比常规病原体培养方法更敏感、快速和准确。考虑到胎儿发育规律、病原体感染进程以及病原体垂直传播的特点，为提高病原体的检出率，针对不同病原体进行羊水穿刺的时间有差异：巨细胞病毒感染通常在孕21周以后，孕妇感染至少6~7周后进行[3,4,5,6]；弓形虫感染可在孕18~20周以后，孕妇感染至少4周后取羊水样本检测[7,8,9]；风疹病毒感染可在孕16~20周，孕妇感染至少3~6周后进行羊水检测[10,11,12]。羊水中巨细胞病毒、弓形虫等病原体核酸检测，多采用定量PCR方法，有研究显示，病毒载量越高，胎儿预后相对越差[3,9]。

（二）血清学检测

血清学检测是分析病原体感染后机体内出现的特异性抗体，与个体的免疫功能有关，适合于感染筛查和机体免疫状态的评估。

1．特异性IgM抗体：

包括IgM抗体特点和IgM抗体检测的临床意义。

IgM抗体特点：IgM抗体是病原体感染后机体内出现最早的抗体。IgM抗体分子是一个五聚体，有10个抗原结合表位（Fab），比其他种类的抗体分子具有更高的效价。五聚体结构特点使得IgM易于与有重复决定簇的抗原结合，容易出现交叉反应，可能出现假阳性结果[13,14]。

IgM抗体检测的临床意义：IgM抗体阳性，提示患者可能处于急性感染期。初次感染期间，IgM抗体滴度一般在1~2个月内急剧上升，达到峰值后逐渐降低[15]，大约3~6个月转阴。但部分人群体内的IgM抗体可以保持较低的滴度水平，并可持续数年[16]。原发感染和复发感染均能产生IgM抗体，因此仅IgM抗体阳性检测结果不能诊断急性感染，也不能区分原发感染和复发感染。

2．特异性IgG抗体：

包括IgG抗体特点和IgG抗体定量检测和动态监测的临床意义。

IgG抗体特点：IgG抗体是血清中含量最多的抗体类型，占人体血清球蛋白含量80%左右。IgG抗体能够通过胎盘，出生时新生儿体内IgG抗体均来自母体，出生后迅速下降，至7月龄时几乎完全消失。新生儿在出生后1~3个月内逐渐合成IgG抗体，大约在7岁时达到成人水平。特异性IgG抗体在IgM抗体出现后产生，随着感染进展，IgG抗体滴度逐步增加达到峰值后进入平台期，在免疫正常的个体内可以长期存在。

IgG抗体定量检测和动态监测的临床意义：IgG抗体的临床价值主要在于其定量结果。在疑似感染期两次取样（间隔2~3周），在同一平台检测特异性IgG抗体滴度，如果第2次检测较第1次检测的滴度有显著增加[4,17]，提示感染。既往基于ELISA方法的研究提示，巨细胞病毒和风疹病毒急性感染期的IgG抗体滴度有4倍以上增加[4,12]；近年基于定量精准度更高的发光法（化学发光、电化学发光等）发现，两次IgG抗体滴度变化如果显著超出实验室的日间检测差异，也提示可能为近期急性感染，但需要临床结合多指标进行综合判断。实验室需要关注的是，由于每个检测平台线性范围有限，超过检测线性范围限制时，建议按试剂说明书稀释后再测，以明确IgG定量结果，只报告大于最大检测线性值会降低其临床辅助诊断价值。

3．IgG抗体亲和力：

包括IgG抗体亲和力特点、检测方法和临床意义。

IgG抗体亲和力特点及检测方法：机体感染病原体后，初次免疫应答产生的IgG抗体与抗原结合能力较弱（低亲和力抗体），经过数周或数月后，机体产生的IgG与抗原结合能力更强，互补性更好（高亲和力抗体），此后高亲和力IgG在体内终身存在[18,19]。IgG抗体亲和力有多种检测原理，结果以百分比表示。以变性剂法为例：利用尿素或二乙胺等变性剂处理结合在抗原上的抗体，低亲和力的抗体很容易受变性剂的影响而被洗脱掉，高亲和力的抗体与相应的抗原结合力强，经过变性剂作用后仍结合在相应的抗原上而未被洗脱，经信号检测分析，待测样本的亲和力=处理缓冲液孔信号值/对照缓冲液孔信号值×100%。不同试剂对高亲和力和低亲和力判定范围不同，应依据试剂盒说明书判断。

IgG抗体亲和力检测的临床意义：IgG和IgM抗体同时阳性时，IgG抗体亲和力检测结果可辅助临床判断是否为近期原发感染。巨细胞病毒特异性IgG抗体研究显示，如IgG抗体检测表现为高亲和力，则可排除近18~20周内的原发感染[5,20]，IgM阳性和IgG低亲和力表示原发感染发生在近3个月，敏感度和特异度均大于90%[18,21]。风疹病毒IgG抗体在不同个体的成熟时间有差异，研究显示一些个体IgG抗体经过6周即可成熟、表现为高亲和力，有些个体风疹IgG抗体成熟需要38周[22,23]。弓形虫IgG抗体亲和力检测多以20周或4个月作为亲和力判断的一个临界时间点[24]。一般而言，IgG抗体高亲和力可排除近3~4个月内的原发感染[25]；IgM抗体阳性，同时IgG抗体低亲和力，提示可能为近期原发感染[18,25]。在临床缺乏IgG抗体基础数据、不能检测到血清学转化情况下，结合IgM抗体检测和IgG抗体亲和力检测，可显著提高原发感染的检测敏感度及特异度至90%以上[18]。需要注意的是，在原发感染之后，特别是药物治疗后，一些个体的IgG抗体低亲和力状态可能持续数月甚至超过1年，所以不能仅凭IgG抗体低亲和力结果判断患者近期的急性感染[26,27]，应结合IgG抗体定量结果等多项指标进行综合判断评估。