蛋白质分离并检测蛋白表达的方法 |
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原标题:蛋白质分离并检测蛋白表达的方法 蛋白质提取 Western Blotting(WB)是一种常用的分离蛋白质并检测 蛋白质表达 的方法。以下是一般蛋白质提取 Western Blotting 的步骤: 1.细胞裂解:用裂解液将细胞破裂,使蛋白质裸露出来。 2.离心:离心使得细胞的碎片、DNA等杂质沉淀下来,得到蛋白质上清液。 3.测定蛋白质浓度:使用BCA或者Lowry方法等常见方法测定蛋白质的浓度。 4.电泳:将提取的蛋白质样品通过聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分离,分离后的蛋白质可被转移到膜上。 5.膜转移:将凝胶上分离出来的蛋白质转移到聚乙烯醇基础的膜上。 6.封闭:将转移后的膜在牛奶粉中进行非特异性的封闭。 7.抗体反应:用特异性抗体与膜上的蛋白质结合。 8.检测:将特异性抗体标记上标记物检测抗体与膜上蛋白质结合的情况。 需要注意的是,蛋白质提取的具体方法需要根据不同的样本和目的进行优化和调整。常见的蛋白质提取方法包括:RIPA缓冲液、NP-40缓冲液、Tris-HCl缓冲液、SDS缓冲液等。https://www.cusabio.cn/technology-110.html返回搜狐,查看更多 责任编辑: |
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