分子生物学常用试剂配制 – 王进的个人网站 |
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DNA电泳试剂 成分及终浓度 配制100mL溶液用量 2mol/L Tris 1mol/L 乙酸 100 mmol/L EDTA ddH2O 24.2g 5.71mL的冰乙酸(17.4 mol/L) 3.72gNa2EDTA·2H2O 补足100mL 50×Tris-乙酸(TAE,pH=8.5)缓冲液 注意事项 1. 准确称量各物质,确保缓冲液处于最佳状态。 2. 不要用Tris缓冲液来配制2mol/L Tris,因为常见的Tris缓冲液用了HCl调节pH,成了Tris-HCl缓冲液,使用纯Tris,配制Tris-乙酸缓冲液。 蛋白Western Blotting试剂 30%丙烯酰胺(29:1) 丙烯酰胺acrylamide 甲叉丙烯酰胺 N’N’-methylene acrylamide 87.6 g 2.4 g 去离子水定容至300 ml, 滤纸过滤避光保存在4℃,保质期1个月。 注:完全避光4℃保存,2年内使用也没什么问题 10% SDS 10g SDS 90ml 去离子水 搅拌溶解 定容至100ml 1.5M Tis-HCL,PH8.8 27.23g Tris-base 80 ml 去离子水 用6N的HCL调节PH值至8.8 定容至150ml,4℃或室温保存 1M Tis-HCL,PH6.8 12g Tris-base 60ml 去离子水 用6N的HCL调节PH值至6.8 定容至100ml,4℃或室温保存 10% 过硫酸铵(APS) 100mg APS 溶于1ml去离子水中 建议新鲜配制,但一般配制好的溶液4℃保存2周没问题 注意事项 1.PMSF剧毒,严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤,吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。为了安全和健康,穿实验服并戴一次性手套操作。一旦眼睛或皮肤接触立即用大量水冲洗之。凡被PMSF污染的衣物应予丢弃。 2. PMSF在水溶液中不稳定。 1%溴酚蓝(bromophenol blue) 加1g溴酚蓝于100ml ddH2O中,搅拌或涡旋混合直到完全溶解。 5X上样缓冲液 Takara公司上的5×SDS-PAGE Loading Buffer配方: 组分浓度: 250 mmol/L Tris-HCl (pH 6.8) 10% (W/V) SDS (电泳级) 0.5% (W/V) 溴酚蓝(BPB) 50% (V/V) 甘油 5-10% (W/V) β-巯基乙醇(2-ME)(使用前加入) 配制量 5 ml 配制方法 1.称量下列试剂置于10ml 塑料离心管中。 1 M Tris-HCl (pH 6.8) SDS (电泳级) 溴酚蓝(BPB) 甘油 1.25 ml 0.5 g 25 mg 2.5 ml 2.加去离子水溶解后定容至5 ml,室温保存。 3.使用前加入10% 2-ME(二巯基乙醇),如50 μl的2-ME加到450μl上样液中。 4.加入2-ME的Loading Buffer可在室温下保存一个月左右。 10×Tris-甘氨酸缓冲液 成分 配制100mL溶液用量1 L Tris 甘氨酸 SDS 30.2 g 188 g 10g 使用时稀释10倍使用 10×转膜缓冲液(10×running buffer) (定容至1L) Tris 甘氨酸 30.3g 144g 不调pH 使用时稀释10倍使用 1×转膜工作液 (定容至1L,4℃保存)(现配现用) 10×转膜缓冲液 无水甲醇 ddH2O 100ml 200ml 700ml 10×TBS 缓冲液(1L) Tris-HCl NaCl 24.3g 88g 用浓盐酸约14ml调节pH值至约7.4(pH试纸检测即可) 1×TBST TBS+Tween-20 0.1%(1ml for 1L) 培养基类 LB培养基 将下列组分溶解在0.9L ddH2O中: 蛋白胨Tryptone 10g 酵母提取物Yeast Extract 5g 氯化钠Nacl 10g 2×YT培养基 将下列组分溶解在0.9L ddH2O中: 蛋白胨Tryptone 16g 酵母提取物Yeast Extract 10g 氯化钠Nacl 5g 注意事项 如需用4M NaOH(约0.5mL)调整pH至7.0,再补足水至1L。分装于锥形瓶并用封口膜进行封口,121℃灭菌20min,4℃保存。 细菌LB固体培养基 在LB液体培养基的基础上,加入1.5g/100ml琼脂粉Agar, 121℃灭菌20min,降温到60℃,稍微烫手,加入抗生素迅速倒平板,每个10cm平板大约倒10ml,4℃保存三个月。 抗生素类 氨苄青霉素(Amp)(100mg/mL) 溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的ddH2O中,定容至10mL。分装成小份于-20℃贮存。常以常50ug/mL终浓度添加于生长培养基。 卡那霉素(kan)(10mg/mL) 溶解100mg卡那霉素于足量的ddH2O中,定容至10mL。分装成小份于-20℃贮存。常以50ug/mL终浓度添加于生长培养基。 注意事项 1.以乙醇为溶剂的抗生素溶液无须除菌处理,用ddH2O配的用0.45或0.22um无菌过滤器过滤除菌。 2.所有抗生素溶液均应放于不透光的容器保存,也可用锡箔纸包裹。 3.抗生素配制出以后4℃可保存3个月,-20℃可保存一年。 核酸蛋白提取类 RIPA裂解液 成分及终浓度 配制500mL溶液用量 50mM Tris(PH7.5) 150mM NaCl 1%TritonX-100 1%脱氧胆酸钠 0.1%SDS 3.02g 4.38g 5ml 5g 0.5g ddH2O至 500ml,调pH值至7.5。混匀后4℃保存,长期保存于-20℃。使用时,加入蛋白酶抑制剂cooktail。 5M NaCl 称取29.22g氯化钠于100mL烧杯中,加入约80mL ddH2O加热搅拌溶解,定容至100mL,高温高压灭菌后使用,4℃保存。 0.5M EDTA(pH8.0)溶液 在80mL ddH2O中加入18.612g EDTA-Na2·2H2O,在磁力搅拌器上剧烈搅拌,用NaOH调节溶液的pH值至8.0(约需2.2g NaOH颗粒)然后定容至100mL,分装后高温高压灭菌备用。室温长期保存。 注意事项 EDTA二钠盐需加入NaOH将溶液的pH值调至接近8.0,才能完全溶解。而且配制时最好使用EDTA钠盐(其较易溶于水,而EDTA较难溶于水,易溶于有机溶剂)。 10mg/ml牛血清蛋白(BSA) 加100mg BSA于9.5ml ddH2O中,定容到10ml,分装贮存于-20℃。 1M二硫苏糖醇(DTT) 在DTT 5g的原装瓶中加32.4ml ddH2O,分成贮存于-20℃。 1M HEPES 将23.8gHEPES溶于约90ml的ddH2O中,用NaOH调pH(6.8-8.2),定容至100ml。 1M HCl 加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的ddH2O中。 25mg/ml IPTG 溶解250mg的IPTG于10ml ddH2O中,分装贮存于-20℃。 1M MgCl2 溶解20.3g MgCl2•6H2O于ddH2O中,定容到100ml。 100mM PMSF 溶解174mg的PMSF(苯甲基磺酰氟)于足量的异丙醇中,定容到10ml,分装避光贮存于-20℃。 打赏赞(16)微海报分享 |
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