蛋白质双向电泳常用溶液配方

2024-07-10 10:02| 来源: 网络整理| 查看: 265

本文介绍了蛋白质双向电泳实验中常用的溶液配方，包括水化/上样缓冲液、溴酚蓝储液、胶条平衡液贮存液、10%(v/v)SDS溶液、4x分离胶溶液、聚丙烯酰胺单体贮存液、10%过硫酸铵、电泳缓冲液、琼脂糖封胶液等9种溶液配方，现与大家分享，欢迎收藏

A.水化/上样缓冲液(rehydration/sample lysis buffer)

水化/上样缓冲液（I） 1ml

urea 8M 0.48g CHAPS 4% 40mg DTT 50~65mM 7~9.8mg or TBP 2mM 10µl 40% Bio-Lyte 0.2%(w/v) 5µl 1%溴酚蓝 0.001% 1µl MilliQ水 650µl

水化上样缓冲液（II）1ml

urea 7M 0.42g thiurea 2M 0.152g CHAPS 4% 40mg DTT 50~65mM 7~9.8mg or TBP 2mM 10µl 40% Bio-Lyte 0.2%(w/v) 5µl 1%溴酚蓝 0.001% 1µl MilliQ水 650µl

1. 水化上样缓冲液（I）中的尿素浓度可以调高到9或者9.8M；用7M Urea和2M Thoiurea溶解蛋白的能力较单用尿素强。

2. 目前常用的去垢剂为CHAPS，也可用Triton X-100、NP-40等代替。

3. 可以加蛋白质酶的抑制剂和/核酸酶。

4. 还原剂可用DTT或TBP，分离碱性蛋白时最好用TBP。

5. 5溴酚蓝作为指示剂，可以监测上样和聚焦过程，如操作熟练，可以不加。

B．溴酚蓝储液

Final concentration Amount Bromophenol blue 1% 10mg Tris-base 50mM 6mg MilliQ H2O to 1ml

C.胶条平衡液贮存液（SDS equlibration buffer）

(50mM Tris-cl pH8.8, 6M Urea, 30% glycerol, 2% SDS, bromophenol blue, 200ml)

Final concentration Amount 1.5M Tris-cl,pH8.8 50mM 6.7ml Urea (Fw 60.06) 6M 72.07g Glycerol(87% v/v) 30%(v/v) 69ml SDS(Fw 288.38) 2%(w/v) 4.0g 1%Bromophenol blue solution 0.002%(w/v) 400μl To 200ml

分装后贮存于-20℃；溴酚蓝可以不加；

用之前在加DTT(20mg/ml)或者碘乙酰胺(25mg/ml)

D.10%(v/v)SDS溶液

SDS(Fw 288.38) 10.0g

MilliQ H2O To100ml

用0.45微米的滤纸过滤室温保存(高纯试剂一般不用过滤)

E.聚丙烯酰胺单体贮存液（Monomer stock solution）

Final concentration Amount Acrylamide 30% 150g N,N’-methylenebisacrylamide or PDA 0.8% 4.0g 5.0g MilliQ H2O To 500ml

用0.45微米的滤纸过滤(可不过滤), 4℃避光保存

F.4x分离胶溶液(4x Resolving gel buffer, 1.5M Tris-Cl pH8.8)

Final concentration Amount Tris-base(Fw 121.1)MilliQ H2OHCl(Fw 36.46) 1.5M 181.5g750mlAdjust to pH8.8 MilliQ H2O To 500ml

用0.45微米的滤纸过滤，4℃保存

G.10%过硫酸铵

Final concentration Amount Ammonium persulphate(APS)MilliQ H2O 10% 1gTo 10ml

当加入水时，新鲜的过硫酸铵会发出“咔嚓”声音。如果没有声音，则需要换新的药品。可少量(10ml)配制，分装后4℃保存。

H.电泳缓冲液（TGS electophoresis buffer）

(25mM Tris,192 mM glycine, 0.1%SDS)

Final concentration Amount Tris base 25 mM 15.1g 7.55g Glycine 192mM 72.1g 36.05g SDS 0.1%(w/v) 5.0g 2.5g MilliQ H2O To 5000mlTo 2500ml

该溶液的pH值不需调整，可直接在大试剂瓶中配制溶液，室温保存。

I.琼脂糖封胶液（Agrose sealing solution）

Final concentration Amount TGS electophoresis bufferAgrose (NA or M)1% Bromophenol blue ---0.5%0.002%(w/v) 50ml0.25g100μl

可在锥形瓶配制，微波炉加热熔化。小份分装，室温保存。

您可能对以下内容感兴趣：原核蛋白表达与纯化蛋白质理化检测蛋白互作研究

【本文地址】

蛋白质双向电泳常用溶液配方

蛋白质双向电泳常用溶液配方

今日新闻

推荐新闻