【实验技术】琼脂糖凝胶电泳结果分析(带案例)

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【实验技术】琼脂糖凝胶电泳结果分析(带案例)

2024-07-12 05:47| 来源: 网络整理| 查看: 265

当我们长期使用一个批次的1×电泳缓冲液进行实验,电泳液里可能会有扩散出来的样品或Marker等,或多或少的会影响到跑胶效果。

另外,用自来水或者10X等高倍电泳液跑胶也是不正确的。前者是因为缓冲体系内缺乏足够的离子,造成电导率很低,DNA迁移速度很慢,甚至完全不动了;而后者则因为电导率太高,造成整个缓冲液产热太厉害,甚至连凝胶都会融化。

(四)跑胶后出现“0”条带现象是为什么?

可能的原因:1. 电极插反了;2. 没有加DNA染色剂。

(五)Maker条带不直是为什么?

可能的原因:

1.电泳液使用次数过多;2.胶板位置发生偏移;3.电泳槽的电极歪斜;4.电泳液过多。

(六)电泳条带变形是为什么?

可能的原因:

1.琼脂糖胶制作时溶胶不完全以致琼脂糖颗粒残留不均匀、有污染或琼脂糖质量不好;2.制胶过程中破坏了点样孔;3.移胶过程使胶孔偏移;4.电压太高,通常情况下电压越低,走出的电泳条带越平整。低电压电泳时,电泳缓冲液也不容易发烫,也能确保在电泳的过程中凝胶不会变形。当然电压太低,等待电泳结果的时间就会延长,一般控制电泳电压≤5V/cm,可保证电泳条带的清晰度。

(七)电泳条带异常亮、边缘不清晰是为什么?

可能的原因: 1.点样质粒浓度过高或者加样量过高;2.软件曝光度过高

(八)条带看起来不清晰、条带未分离是为什么?

可能的原因:

1.软件焦距没调好;2.凝胶浓度影响:长片段的DNA选用低浓度的凝胶电泳,短片段的DNA则选用高浓度的凝胶电泳;3.电泳时间不足。

(九)电泳条带出现“拖尾”的现象是为什么?

可能的原因:

1.上样量过高,加样量的多少应依据加样孔的大小及DNA片段的长度而定,加样孔大时上样量应相应加大;2.核酸染料过多,未按规定比例上样、加核酸染料,在过高温度情况下添加核酸染料等

(十)电泳条带太暗是为什么?

可能的原因:

1.上样量不足;2.核酸染料效果下降:染料过期或保存不当、凝胶在空气中放置过久或电泳缓冲液中泡太久都会导致核酸染料效果下降;3.凝胶系统拍照时没有选择最适合核酸染料的激发波长或曝光参数选择不当;4.DNA降解;5.产物浓度过低没跑出来,需再次PCR。

(十一)非特异性条带/PCR产物与目的大小不符?

可能的原因:

1.质粒不同形态的条带;2.试剂被污染。包括水,酶,引物等;3.PCR产物退火温度太高,降低退火温度,增加退火时间,减少循环数等;4.酶加入过多;5.引物特异性不好,需重新设计引物。返回搜狐,查看更多



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