1.处理细胞

a)悬浮细胞：直接收集，离心，(300g，5min，4℃)；使用A液重悬并计数；

b)贴壁细胞：使用胰酶消化，收集，离心(300g，5min，4℃)；使用A液重悬并计数；

2.计算所需冻存管的数量[总细胞量/单管冻存量=冻存管的数量]；

3.在冻存管上标记冻存信息，包括细胞名称，冻存数量，冻存日期，冻存人姓名等内容；

4.向装有细胞的离心管中加入适量A液重悬细胞（A液体积根据细胞密度确定，推荐不超过10×10^6/ml），充分混合成单细胞细胞悬液；

5.加入与细胞悬液等体积的B液，上下轻轻吹打，将悬液充分混合，确保细胞浓度均匀；

6.将细胞悬液等分到每个冻存管中，旋紧盖子，置于程序降温盒中，放入-80℃冰箱；