高效液相色谱图中峰面积、峰面积比都是代表什么呢？ 分析测试百科网wiki版

峰高指待测组分从柱后洗脱出最大浓度时检测器输出的信号值，单位一般为mAU，AU或mV，也可代表相对含量，但不如峰面积准确。

峰面积指峰高与保留时间的积分值，单位一般相应为mAU*min，AU*min或mV*min，代表相对含量比较准确。

峰面积比代表各物质的相对百分含量，单位一般为%。

峰高和峰面积的选择

在色谱定量分析中，选用峰高法还是选用峰面积法，主要决定在检测器的线性范围内，峰高和峰面积测量的准确性和重复性。除了归一化法最好用峰面积法外，其他三种定量方法中峰高和峰面积都可用作精确的定量方法。

在检测器的线性范围内，峰高和峰面积测量的准确性受色谱分离度的影响，要准确地测量峰高和峰面积，色谱分离应达到一定的分离度才行。

于世林老师编著的《高校液相色谱方法及应用》

分析峰的个数，位置，峰高，峰面积

作者：秋硕 链接：https://www.zhihu.com/question/359904536/answer/1782634211 来源：知乎 著作权归作者所有。商业转载请联系作者获得授权，非商业转载请注明出处。  

色谱图其实简单地讲是一个横坐标是时间；纵坐标是电信号的二维图谱。

高效液相色谱法，你可以简单地想象，固定相是一个多空海绵状的柱形结构，样品在孔洞中进进出出。因为各个物质的吸附能力不同，所以才会在色谱图中拉开距离。

实验相关的参数：

保留时间是溶质通过色谱柱所需的时间。这种特性可以在一种混合物的几个组分之间共享，这就是为什么应用MS方法的原因。由此产生的色谱图显示保留时间与强度(存在的组分量)的关系。

1、保留时间：也就是可以定性的数据参数

保留时间是溶质通过色谱柱所需的时间。这种特性可以在一种混合物的几个组分之间共享，这就是为什么应用MS方法的原因。由此产生的色谱图显示保留时间与强度(存在的组分量)的关系。

如果使用同样的色谱柱，同样的流动相，分析同样的样品，那么这个样品的保留时间，应该是固定的。不同保留时间的色谱峰，应该表现出的是不同的物质。如果你跑的是反相色谱，那么色谱峰越靠后，它对应物质的极性也就越小。

2、峰面积：也就是可以定量的数据参数

峰值检测在滤波之后进行，其中峰值表示成分或成分的断裂。峰可以根据它们覆盖的高度或面积来选择。通过将存在的峰与已知的峰进行匹配，可以通过眼睛识别某些峰模式。这可以帮助确定存在什么分子，或者分子中存在多少原子。

色谱图中可以读出来的参数，在同一个色谱条件下，同一个物质的浓度和峰面积是成正比的。也就是说，如果你配制1.0mg/ml的X物质，进样后峰面积是10000，那么，你配制0.5mg/ml的X物质，进样后峰面积差不多就是5000

3、波长:这个是可以顺利进行试验的前提条件

同一样品，同一方法，同一色谱柱，在不同波长的峰面积是不同的。一个物质指在某些特殊波长下有吸收。比如一个物质在210nm和254nm处有吸收。那么波长在280nm处可能无法检出该物质。所以一个实验方法开始时要进行波长扫描。

答：分析方法其实有个入门级别的。

1，首先区分溶剂峰跟产物峰。在区分这两个之前，你要知道一件事情。我们都是用高极性溶剂来溶解待测产物的（我用的是DMSO溶解的产物，它的极性在常用溶剂里面排第四），所以如果你用的仪器如果不是正相色谱仪，5分钟内必定会出一个溶剂峰。除了这个溶剂峰以外，后面的就都是特征产物。做到了这一步你就成功了一半。

2，然后就是根据峰值数量的多少来判断产物多样性。主要是数哪些非常尖锐的峰，然后比大小。

3，最后就是各种产物的含量配比，比较峰高就行了。

4，高效液相色谱图的目的就是在于探究待测物中产物多样性以及含量配比情况。

链接：https://www.zhihu.com/question/359904536/answer/1932677473

峰面积_百度百科

峰面积比是指在色谱图，背景线以上部分的总面积，表示待测物的含量，面积越大，含量越高。

内标法是一种间接或相对的校准方法。在分析测定样品中某组分含量时，加入一种内标物质以校准和消除出于操作条件的波动而对分析结果产生的影响，以提高分析结果的准确度。 内标法在气相色谱定量分析中是一种重要的技术。使用内标法时，在样品中加入一定量的标准物质，它可被色谱拄所分离，又不受试样中其它组分峰的干扰，只要测定内标物和待测组分的峰面积与相对响应值，即可求出待测组分在样品中的百分含量。采用内标法定量时，内标物的选择是一项十分重要的工作。理想地说，内标物应当是一个能得到纯样的己知化合物，这样它能以准确、已知的量加到样品中去，它应当和被分析的样品组分有基本相同或尽可能一致的物理化学性质(如化学结构、极性、挥发度及在溶剂中的溶解度等)、色谱行为和响应特征，最好是被分析物质的一个同系物。当然，在色谱分析条什下，内标物必须能与样品中各组分充分分离。需要指出的是，在少数情况下，分析人员可能比较关心化合物在一个复杂过程中所得到的回收率，此时，他可以使用一种在这种过程中很容易被完全回收的化合物作内标，来测定感兴趣化合物的百分回收率，而不必遵循以上所说的选择原则。

外标法external standard method 色谱分析中的一种定量方法，它不是把标准物质加入到被测样品中，而是在与被测样品相同的色谱条件下单独测定，把得到的色谱峰面积与被测组分的色谱峰面积进行比较求得被测组分的含量。外标物与被测组分同为一种物质但要求它有一定的纯度，分析时外标物的浓度应与被测物浓度相接近，以利于定量分析的准确性 [1]  。

在色谱定量分析中，选用峰高法还是选用峰面积法，主要决定在检测器的线性范围内，峰高和峰面积测量的准确性和重复性。除了归一化法最好用峰面积法外，其他三种定量方法中峰高和峰面积都可用作精确的定量方法。

在检测器的线性范围内，峰高和峰面积测量的准确性受色谱分离度的影响，要准确地测量峰高和峰面积，色谱分离应达到一定的分离度才行。图2-3-18 至图2-3-22给出了峰高比1:1至16:1 时的标准分离度曲线，每张图上的黑点表示了每个峰峰尖的真实位置，此黑点与图中所示的峰尖的垂直位移就是测量误差。峰高比越大，要求能准确测量峰高的分离度也越大。峰高比为1/1和2/1时，峰高能得到准确测量的最低分离度为0.8；峰高比为4/1 时，峰高能得到准确测量的最低分离度为1.0；峰高比16/1 时，峰高能得到准确测量的最低分离度为1.25。关于分离度对峰高测定准确度的影响大致可认为：当分离度Rs-1.0 时，相对峰高从128:1 变化到1:128时，峰高的测量误差小于+-3%。

在分离度较好，色谱峰形较好，峰面积可以准确测量时，以用峰面积法定量为好。特别是在气相色谱使用程序升温和液相色谱使用多元梯度洗脱时，最好使用峰面积法定量。但当分离度不好，色谱峰形不好（如严重拖尾）时，峰面积测量引起的误差较大，此时使用峰高法定量较好。保留时间短的色谱峰峰形较尖（峰尾宽较小），此时峰高测定较峰面积测定准确，宜用峰高法定量；而保留时间长的色谱峰峰形较宽（峰尾宽较大），此时峰面积测定较峰高测定准确，宜用峰面积法定量 [2]  。

怎么看懂液相色谱图（液相色谱仪图解）_环球信息网

对于每一个身经百柱的实验人员来说，液相色谱图是他们打开未知物质世界的大门，科研中的很多问题都能从色谱图中得到很好的反映，有些问题可以通过改变设备参数得到解决，而有些问题则必须通过修改操作程序来解决，毕竟，正确选择色谱柱和流动相才是得到好的色谱图的关键。

狮妹在此根据大家实践中可能会经常遇到的一些图谱问题进行了整理汇总，大家一起来看一下吧。

01 拖尾峰

1、筛板阻塞：柱子两头的过滤筛板如果堵塞，样品就会在筛板部分受阻而形成时间延迟，使得样品在柱后流出时峰型形成拖尾。需要通过反冲色谱柱，或者更换筛板。

2、色谱柱塌陷：是指色谱柱由于其它原因引起了柱效率丧失，不能对物质形成保留，使得物质不在固定相上保留而随流动相流出，但是又还有一点柱效，因此形成拖尾。需要重新填充色谱柱或者更换色谱柱。

3、有污染：即样品不在同一起跑线起跑，从后面开始跑得到达终点稍晚，表现出拖尾。更换色谱柱或者采用有机溶剂梯度洗脱1h以上，以冲洗柱子。

4、流动相PH值选择错误：如某PH下有的样品存在分子型和离子型的动态平衡，离子型的陆续向分子型转化就会表现出拖尾。调节PH值可抑制分子解离，改善拖尾，对于碱性化合物，相对较低的PH值更有利于得到对称峰。

02 前沿峰

1、样品过载：被保留的样品在正常出峰时间前陆续出来，形成前沿峰。降低样品含量。

2、样品溶剂选择不恰当：当样品溶剂的洗脱能力大大强于流动相时会出现前沿峰，例如，在反相色谱中用已腈做样品溶剂，而流动相的洗脱力较弱时会出现前沿峰。选择流动相或者接近流动相的比例作为样品溶剂。

3、色谱柱损坏：色谱柱柱效损失，不能对物质形成保留。更换色谱柱。

4、在大峰前有小峰出现，假象前沿峰，即大峰前包埋了没有分开的小峰。调整流动相洗脱梯度。

03 倒峰

1、样品折射率小：示差折光检测器测的信号是折射率，出现倒峰的原因是组分的折射率小于流动相。

2、密度的原因：密度不一样，出来的峰正倒不一样。

3、进样所致：进样时，样品对原有流动相产生瞬间阻断，然后瞬间涌流，所以产生先倒后高的“溶剂峰”。

4、基本不可避免：试着使用与流动相相同的溶剂作为溶样溶剂，另外进样之前注意平衡跟冲洗参比池。倒峰基本上不能避免，但是这样操作会小些。

04 包裹

1、色谱柱问题：色谱柱流失，柱子被污染。

2、样品溶解度差：温度可能会影响到溶解度。

3、流动相不均匀：一般是流动相没配好，管路流动相不均匀，也会导致上述现象。

05 基线漂移

1、柱温波动：即使是很小的温度变化都会引起基线的波动，通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器。使用柱温箱，控制好柱子和流动相的温度，在检测器之前使用热交换器。

2、流动相不均匀：流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移。使用HPLC级的溶剂，流动相在使用前进行脱气处理。

3、流通池被污染或有气体：用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池。如有需要，可以用1N的硝酸(不要用盐酸)。

4、流动相配比不当或流速变化：更改配比或流速，为避免这个问题可定期检查流动相组成及流速。

5、样品中有强保留的物质：以馒头峰样被洗脱出，从而表现出一个逐步升高的基线。使用保护柱，如有必要，在进样之间或在分析过程中，定期用强溶剂冲洗柱子。

06 出现宽峰

1、色谱柱污染或失效，造成塔板数降低：更换同样类型的色谱柱，如果新柱子可以提供对称的色谱峰，则用强溶剂冲洗旧柱子。

2、柱子与检测器之间的管路太长或管路内径太大：更换内径较小的短管路。

3、检测器对反应时间或池体积响应过大：减少响应时间或使用更小的流通池。

07 基线噪音

1、在流动相、检测器或泵中有空气(尖锐峰)：流动相脱气，冲洗系统以除去检测器或泵中的空气。

2、漏液：检查管路接头是否松动，泵是否漏液，是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要，更换泵密封。

3、流动相混合不完全：用手摇动使混合均匀或使用低粘度的溶剂。

4、温度影响(柱温过高，检测器未加热)：使用柱温箱，减少温度差异或加上热交换器。

5、在同一条线上有其他电子设备(偶然噪声)：断开LC、检测器和记录仪，检查干扰是否来自于外部，加以更正。采用精密级稳压电源。

08 分离度不够

1、流动相梯度洗脱设置不合理：优化梯度洗脱程序。

2、流动相污染或变质(引起保留时间变化)：重新配置流动相。

3、保护柱或分析柱阻塞：去掉保护柱进行分析，如果必要则更换保护柱；如果分析柱阻塞，可进行反冲；如果问题仍然存在色谱柱可能被强保留的污染物损坏，建议使用恰当的再生程序；如果问题仍然存在，进口可能阻塞了，更换入口处的筛板或更换色谱柱。

HPLC故障排除指南

在HPLC系统中，引起问题的来源很多。首先界定问题，然后从源头上杜绝问题。

使用表1确定是哪个或哪些组件造成的问题。通过排除法，通常可以帮助您查明具体原因并纠正问题。

色谱图灵敏度低，基线上升、噪音、尖峰等通常因流动相所致。在梯度洗脱中，流动相中的污染物特别麻烦。它们可能会使基线上升，随着受污染的组分增加，可能出现伪峰。

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为防止系统中出现气泡，对流动相溶液脱气。通常首选在线脱气机，但如果流动相不含任何挥发性成分，则可以选择使用喷氦脱气。

泵必须在各种条件下向色谱柱提供恒定的溶剂流量。现代HPLC泵采用单活塞或双活塞、注射器或隔膜泵设计。

泵系统问题通常易于发现和纠正。一些较常见的问题包括色谱图中保留时间不稳定，基线噪音或尖峰。泵配件或密封件泄漏会导致色谱分析不良。泄漏的确切迹象是在泵连接处有盐析出。应每天用新鲜的去离子水 从系统中冲洗缓冲盐。

进样器可快速地将样品导入系统，对溶剂流的干扰最小。HPLC系统目前采用可变环、固定环和针式进样器。进样器有手动、气动或电动驱动选择。

进样器的机械问题（例如，漏液、毛细管管线堵塞、密封件磨损）易于发现和纠正。使用柱前过滤器可防止因进样器密封件的物理老化而导致的色谱柱筛板堵塞。不可再现进样等其他问题，则较难解决。

定量环未完全填充、进样溶剂与流动相不相容或样品溶解度差，均可能导致峰高易变、裂峰和宽峰。尽可能在流动相中溶解和注入样品。否则，应确保进样溶剂的洗脱强度低于流动相（表3）。请注意，某些自动进样器使用单独的针筒清洗液。确保清洗液与流动相兼容且比流动相弱。在反相和正相分析之间切换时，这一点尤为重要。

虽然流动相入口过滤器、进样前过滤器、柱前过滤器、以及保护柱不属于大多数设备的必备部件，但它们大大减少了与复杂分离相关的问题。我们建议让所有样品经过0.45 μm或0.2 μm针筒过滤器过滤。我们强烈建议使用保护柱。

过滤器和保护柱可防止颗粒和强保留化合物积聚在分析柱上。这些一次性产品的使用寿命取决于流动相成分、样品纯度、pH值等。当这些装置被颗粒污染或堵塞时，压力增加，峰值变宽或分裂。例如，图B给出了使用保护柱的示例。

图 B.Supelguard柱延长分析柱的寿命

无论色谱柱是否包含键合的反相或正相、离子交换、亲和性、疏水性相互作用、分子筛或树脂/硅基填料，与分析柱相关的最常见问题是劣化。劣化的迹象包括峰形差、裂峰、肩峰、解析度降低、保留时间减少和背压高。这些迹象表明污染物积聚在筛板或色谱柱入口处，或者填料层中存在空洞、沟槽或凹陷。

在高效柱中，劣化更明显。例如，与由2微米或更大筛板截留的5微米或10微米填料相比，由0.5微米筛板截留的3微米填料更容易堵塞。适当的色谱柱保护和样品制备对于发挥色谱柱的最大功效至关重要。

过载色谱柱会导致峰形差和其他问题。

色谱柱容量取决于多种因素，但色谱柱上分析物总量的典型值如下：