流式细胞术

2024-07-17 06:46| 来源: 网络整理| 查看: 265

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细胞凋亡概念及其特征细胞凋亡的典型特征凋亡 (Apoptosis) 凋亡研究热度分析细胞凋亡与疾病细胞凋亡热点问题凋亡分期凋亡检测 —— Annexin V 关键技术 9 项细胞凋亡概念及其特征

细胞凋亡（Apoptosis）：也称细胞程序性死亡（Programmed Cell Death，PCD），是为维持内环境稳定，由基因控制的细胞自主的有序的死亡，在多细胞生物去除不需要的或异常的细胞中起着必要的作用，属于细胞的“自杀”行为。

细胞凋亡的典型特征线粒体膜电位的丧失；细胞膜PS（磷脂酰丝氨酸）的外翻；细胞核凝缩和断裂。凋亡 (Apoptosis)

程序性死亡，机体为更好地适应生存环境而采取的一种主动死亡过程。

凋亡研究热度分析细胞凋亡与疾病凋亡不足凋亡过度肿瘤心血管疾病自身免疫病血液系统疾病病毒感染重症肝炎退行性神经疾病如老年痴呆症帕金森症细胞凋亡热点问题细胞接受胞外信号的刺激启动凋亡胞内凋亡特异性蛋白酶（如Caspase）的活化线粒体对凋亡的调控 Bcl-2蛋白家族对凋亡的调控凋亡分期

早期事件：Ø磷脂酰丝氨酸(PS)外翻Ø线粒体受损Ø细胞色素C释放中期事件：ØCaspase 3/7/8/9活化晚期事件：ØDNA片段化凋亡检测 —— Annexin V

关键技术 9 项接种对数生长细胞密度通常不超过1×106/ml，以免引起凋亡收集上清消化全收因部分凋亡细胞可能悬浮于培养基中，须先收集上清，离心收集沉淀，再消化收集贴壁细胞，合并上清和消化下来的细胞。消化 Accutase避免因消化过度使PS外翻，造成假阳性。用eBioscience的Accutase酶替代胰酶，在多种细胞系中得到验证，对细胞更温和、长时间消化也没有影响。（对凋亡不明显的实验强烈推荐）使用细胞消化液－－实际效果比较

阳性质控联科 Multisciences没有明显的凋亡，该如何调节补偿以及设门？联科凋亡试剂盒配备阳性质控液，使补偿调节更方便。

方案 4管单双混合染色 Blank Annexin V PI Annexin V+PI

上机

Blank 50%Blank +50%Annexin V 50%Blank +50% PI 50%Blank+50%Annexin V+PI 50%Blank+25%Annexin V+PI+25%Annexin V 电压足够大，大到快要超出边界。

细胞数量足够多，多到细胞全部收集。补偿横平竖直：3、4象限横平；2、4象限竖直漂亮图片黄金分割（三分原则）。

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