【干货】重组蛋白/细胞因子选择与使用攻略

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【干货】重组蛋白/细胞因子选择与使用攻略

2024-06-18 09:00| 来源: 网络整理| 查看: 265

在选择重组蛋白产品时,内毒素水平也是参考的一大要素。特别是重组蛋白应用于细胞/动物实验实验、药物研究时,内毒素水平会间接影响实验结果。

综合以上两个因素,我们就能从众多产品中选出 C 位啦!毕竟,我们靠的是实力。

产品溶解篇

第一步:开盖前需离心

实验操作:10,000-12,000 rpm 离心 30 s。

冻干粉在运输过程中会粘附于管壁或管盖,在开盖使用之前,需先离心,将冻干粉收集于管底。MCE 保证每管产品的蛋白总量达到标示含量。

第二步:产品复溶

实验操作:向冻干粉中加入复溶 buffer/无菌水,用枪头轻轻吹打混匀,重悬至浓度不低于 100 μg/mL。

PS:将冻干粉稀释到指定的浓度范围,有利于维持重组蛋白良好的稳定性。

第三步:产品保存

实验操作:1) 实验周期<1 周:复溶后的重组蛋白液体可放在 2-8℃ 保存;2) 实验周期>1 周/复溶的产品一次性用不完:将已重悬的蛋白溶液用含载体蛋白 (0.1% BSA,5% HAS,10% FBS,5% 海藻糖) 的溶液稀释,分装冻存。复溶后,-20℃ 可保存至少三个月,推荐 -80℃ 长期保存,以获得更稳定性能的产品。

载体蛋白可以预先封闭管壁上蛋白结合位点,使重组蛋白粉末不会粘附于管壁。在分装冻存前,用含载体蛋白的溶液稀释可以保证低浓度的重组蛋白仍然维持较高的稳定性。

产品细节篇

1、溶解过程中切记不要采用涡旋震荡辅助溶解

我们习惯在固体溶解时采用涡旋震荡助溶。但对于细胞因子来说,具备一定的空间结构会使其活性更佳。正确实验操作是用移液器枪头轻轻吹打混匀或者上下颠倒混匀。若无法做到充分溶解,可以将复溶产品至于水平摇床低速摇一段时间或 4℃ 静置 2 h 以上。

2、稀释用的含载体蛋白的溶液不能用水来进行实验

特别注意的是,稀释用的含载体蛋白的溶液指的是指有一定缓冲能力、pH 值为中性的溶液,如 PBS、培养液 DMEM 或者 RPMI1640 等。不能用水来代替。

3、重组蛋白活力值与计算方法

MCE 的重组蛋白产品并未采用 WHO 设定的标准来测定活力值,以上计算公式并不适用于 “International Units” 和 “ED50” 的转换关系,需要采用国际标准品对比相同实验获得该重组蛋白的 IU 值。返回搜狐,查看更多



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