Primer Premier 5.0 是一种用来帮助研究人员设计最适合引物的应用软件利用它的高级引物搜索引物数据库巢式引物设计引物编辑和分析等功能可以设计出有高效扩增能力的理想引物也可以设计出用于扩增长达50kb以上的PCR产物的引物序列。

前些时间有朋友问我怎样用Primer 5.0来设计引物，ok，来看看吧！

下载Primer 5.0链接：https://pan.baidu.com/s/1TQtzfx0qYgHceftCDMQxyQ 提取码：b1h5 

安装Primer 5.0

启动 Primer Premier v5.0　与 Primer Keygen(注册机），在 Primer Premier v5.0 程序界面的 “GeneTank” 处点击 “Active Product” 按钮，将ID号填到注册机上，get到激活码，并在Primer 5.0里输入注册机“generate”的激活码，提示注册成功即可！

引物设计

先准备好你的目的序列。打开Primer5.0，依次打开File→New→DNA sequence。将目的序列输入到文本框中

点击ok完成导入，点击Primer

会出现这样的界面，接着点Search

然后里面会有很多参数

看个人需要了，首先可以设计PCR引物、测序引物和探针引物。另外可以调节引物的长度、引物的范围、目的片端的长度，如果都没有什么要求的会直接就自动默认就好了。

一下子就找到了好多

选择一条合适的导出来就好了，简单吧！

当然不要忘记了引物设计的黄金准则哦（引物设计不合理，你中招了吗？）

另外，选择的引物最好进行Blast分析一下，可以知道它是否会比对到其他基因上的同源序列。比如上NCBI，找到Blast界面

翻下一点有一个primer blast

将上下游引物序列输入

注意物种及参考序列就好了

比对分析到没有交叉到其他基因的同源序列就可以了