但是，明胶不太适合用于生物素放大系统的检测，因为明胶含有内源性的生物素，对检测信号会产生干扰。很怀念Sigma的棕色大瓶1000ml液体明胶！记得货号是G7765。泪奔了。

4) 正常血清 (如：胎牛，家兔，山羊血清等。)

所谓的正常，就是动物无疾病，没有经过免疫如疫苗等，全血清中含有大量蛋白，可以用于封闭，但是一般情况下我们用的很少，

因为，它的封闭效果与BSA和脱脂奶粉相比，没有什么优势，而且血清也很贵，需要封闭的浓度也很高(~5-10%)。正常血清中含有大量的免疫球蛋白，会和哺乳类动物的抗体发生交叉反应。

5) 纯化的酪蛋白

酪蛋白是从牛奶中提取的蛋白质，是一种很老的封闭剂。著名的casein block现在还在广泛使用。必须知道casein就是一种磷酸化蛋白，因此不能用于磷酸化的检测。

单纯的酪蛋白不太好溶解，一般都是以钠盐的形式使用。溶解后的溶液呈半透明状态，好多人以为是污染后的浑浊，其实这只是一种错觉而已。

6) 非蛋白类封闭剂

Polyvinylpyrrolidone (PVP)是一种非蛋白类的水溶性聚合物，也是一种常用的封闭剂。可以结合NC膜或PVDF膜，与其它封闭剂联合使用，起到封闭作用。

尤其对于小分子的检测，大分子量的封闭剂的空间位阻，会影响小分子的结合。像PVP这样的封闭剂有很多，比如PVA，S7，S9等表面活性剂。

尤其是在侧向层析产品中，应用相当广泛。非蛋白类的封闭剂还包括糖类，蔗糖以及PEG也是一种很好的封闭剂，除了具有良好的封闭效果，还会起到稳定蛋白的作用。

7）吐温系列

谈了这么长时间的封闭液，居然没有提到吐温。有点不应该。虽然它也属于非蛋白类封闭剂，属于聚合物，属于表活，但是，作为封闭剂，必须单独拿出来讲。

吐温在封闭剂当中，我觉得称得起茶中大红袍，酒中的拉菲。我们常用的PBST和TBST，后面那个大写的T就是吐温：Tween。

它真实的名字叫做Polysorbate Sorbitan ，中文叫做聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯，根据结构不同分为Tween-20，60，40，80等。

吐温的作用很强大，可以加在裂解液里溶解膜蛋白，可以加在结合液里用于稳定蛋白，可以和BSA混合作为封闭液，关键的吐温本身没什么毒性，还可以作为食品添加剂。

每个学免疫的人，对于封闭的理解，基本上都是从Tween-20和BSA开始启蒙的。

8) 商业化封闭液

一般情况下这些封闭液都含有一些神秘的蛋白和配方，再起一个响亮的名字：如SuperBlock。

可以推测其中不含磷酸化蛋白，不含有免疫球蛋白，不含白蛋白和生物素。还有一个特点就是封闭速度很快，让你可以缩短实验的时间。缺点就是很贵，一分钱一分货。

既然话题是封闭液，不能单说封闭剂，还得谈谈溶液的部分。选择什么样的溶液？要根据自己的检测要求来定。

最常见的是PBS或TBS，还有一些buffer比如碳酸盐，硼酸盐，都是碱性的缓冲液，醋酸盐buffer属于酸性的。

记住如果检测磷酸化蛋白，或用于碱性磷酸酶系统，不要用PBS。具体的使用还得在实战中进行摸索。

还有一类特殊的封闭剂属于特殊的有针对性的的封闭，最著名的就是HAMA。

免疫分析中出现问题的一个常见原因是干扰性抗体，如众所周知的人抗鼠抗体（Human anti-mouse Antibodies，HAMA）、一般的抗动物抗体、嗜异性抗体（Id）或类风湿因子（rheumatoid factors，RF）。

一般来说，这些抗体干扰主要发生在夹心法的免疫分析中，即基于捕获抗体和检测抗体。干扰性抗体可以交联捕获抗体和检测抗体，导致假阳性结果。

或者，它们可以阻止抗原与检测抗体的结合，甚至引起检测抗体的聚集，导致假阴性结果。由于这种封闭剂的针对性很强，一般情况下都称之为“阻断剂”，中文用词讲究。

在分子生物学实验中还有一个常用的，也很奇葩的封闭剂，就是鲑鱼的精子DNA。也不知道是谁先想出来的。

最后，如果要用一个形象的东西来比喻封闭这个概念，那就是家乡的一道菜：珍珠圆子，内核其实是一个肉圆，滚上一层糯米，再用淀粉来封闭那些游离的位点。蒸好的圆子表面的糯米闪闪发光。敢情大厨也有封闭的逻辑思维！

有道是：

实验奇思妙想妙手翻动乾坤封闭正本清源结果通透清晰返回搜狐，查看更多