2022年6月30日，OECD测试指南通过了10项实验方法（表1）。其中体外方法共7项，涉及皮肤致敏、眼刺激、遗传毒性和内分泌干扰。体外科学31介绍了指南文件442E新增的附件4:基因组变应原快速测试法(GARD™skin)。本期介绍OECD新增指南文件TG 467: 严重眼损伤和刺激的规定性方法。

表1 2022年OECD更新认可的替代方法

一、规定性体外方法的组合

目前OECD已发布了7个眼严重损伤和刺激性的替代方法，包括437、438、460、491、492、494和TG496。这些方法是标准化的、预测模型确定的和可以作出判定的，被称为规定性方法。鉴于单一方法的局限性和范围，这些体外方法产生的数据应当组合使用，并与物理化学性质，计算毒理学和化学类似物的交叉参照等判断性方法一起作为证据进行WOE预测。在整合测试和评估方法(IATA)制订的原则下，如何进行方法的组合是实践中需要解决的问题。

规定性方法（define approaches,DA）：由一组固定来源的数据和信息 (指数据的类型)加上一个解释数据的算法(指数据的解释过程)组成，通常作为毒性预测的一种方式。规定性方法是可以被准确验证和标准化的。

判断性方法（judgement-based approaches, JBA）：指需要依靠专家判断得到安全性结论的方法，方法中的元素只能做到部分协调一致，例如，交叉参照方法。

二、OECD 467要点

OECD467包含了两种基于规定性方法的用于非表面活性剂液体眼刺激性测试的组合，测试结果可用于法规监管目的，即用于危害识别中区分GHS的三个类别：第1类(Cat.1)严重眼损伤，第2类(Cat.2)眼睛刺激和无分类（No Cat.）。这两种方法都以BCOP为核心方法，分别组合了体外重建人类角膜样上皮试验和短期暴露试验。

规定性方法1(DAL-1)，基于物理化学性质和体外数据，用于眼睛危险识别，用于纯非表面活性剂液体。组合方法为牛角膜浑浊和渗透性试验（BCOP,TG437)和重建人类角膜样上皮试验(RhCE，TG492），以及测试化学物质的物理化学性质。

规定性方法2(DAL-2)，基于体外数据，用于非表面活性剂的纯液体、液体和固体。组合方法为BCOP和体外短时间暴露试验(STE,TG491)。

三、规定性方法组合1（DAL-1）

DAL-1有2个组合方案，取决于选择角膜上皮的类型。

DAL-1方案1（理化+RhCE+BCOP）；第一步先根据物理化学排除（WS：mg/mL水溶性；或LogP：辛醇-水分配系数；VP：mmHg；蒸汽压力；ST:纯液体的表面张力），第二步RhCE测试方法用于识别无分类，第三步BCOP LLBO，用于识别分类1。 

DAL-1组合方案2（RhCE+理化+BCOP）；第一步用于确定无分类的RhCE测试，第二步：物理化学排除（WS：mg/mL水溶性；或LogP：辛醇-水分配系数；VP：蒸汽压力mmHg；ST：纯液体的表面张力）以确定无分类，第三步BCOP LLBO用于识别分类1.

 四、规定性方法组合2（DAL-2）

组合方法2采用了BCOP+STE两个方法的组合。测试顺序可以选择自上而下法或自下而上法，既可从STE测试方法开始，然后进行BCOP LLBO测试方法；也可以先从BCOP开始，再进行STE测试。

五、适用范围

组合方法适用的液体化合物涵盖了广泛的用途和化学品类别，包括各种有机官能团(79个不同的)，参考了根据OECD QSAR工具箱分析(3.2版）。这些化学物质包括小分子和大分子，以及疏水物质和亲水物质。其适用性如下：

1、两个组合的目的不是为了区分2A类和2B类。

2、两个组合均不适用于固体（即不能用移液枪吸取的物质）和某些表面活性剂。

3、DAL-1不适用于表面活性剂和固体物质。DAL-1适用于纯液体，不包括混合物、UVCBs和多成分物质。对于浓度为>为5%和