荒漠肉苁蓉（Cistanche deserticola Y.C.Ma）又称肉苁蓉，为列当科肉苁蓉属沙生植物，主要寄生在梭梭、红柳等荒漠植物根部，其主要成分包括多糖、苯乙醇苷类化合物、有机酸、生物碱等[1]，其中多糖含量较高具有抗氧化、抗病毒等调节免疫系统多种功能；苯乙醇苷类化合物具有抗肿瘤、抗衰老等多种功能[2, 3]，其含量被定为评定肉苁蓉药理学活性的重要指标[4]。由于肉苁蓉极高的药用价值[5]，野生肉苁蓉过度开采濒临灭绝，鉴于此人工栽培肉苁蓉已经在新疆大面积成功种植[6]。虽然国内外学者对肉苁蓉的化学成分、有效成分的分离、纯化及药理作用的研究、抗衰老活性成分、食品保健等诸多方面做了大量研究，但对肉苁蓉提取物的免疫活性研究较少，尤其是比较野生与栽培荒漠肉苁蓉提取物免疫活性的研究还未见报道。

树突状细胞（Dendritic cells，DCs）是目前功能最强的专职性抗原提呈细胞，在诱导免疫应答过程中起着重要作用，其成熟状态决定机体免疫调节的方向，DCs由未成熟转向成熟，细胞表面共刺激分子高表达[7]，同时迁移到淋巴结诱导抗原特异性T细胞增殖，激活免疫应答[8, 9]，因此，对DCs的研究为天然产物调节免疫功能提供了新的视角。

本实验以新疆野生及栽培荒漠肉苁蓉为原材料，利用超声结合水提醇沉法[10]，经Sevag试剂除蛋白[11]制备水提物和超声辅助制备醇提物，水提物中主要活性分成为多糖，蒽酮硫酸法[12]测定多糖含量；醇提物中主要的活性成分为苯乙醇苷类化合物，Al（NO3）3-NaNO2-NaOH显色体系[13]测定苯乙醇苷类化合物含量，并通过脚掌免疫BALB/c小鼠，流式细胞术检测提取物对BALB/c小鼠体内DCs成熟的影响，初步评价新疆野生及栽培荒漠肉苁蓉提取物的免疫活性，旨在为更好地开发利用新疆栽培荒漠肉苁蓉提供参考，也为利用新疆药用植物筛选新型疫苗佐剂奠定基础。

5-6周雌性BALB/c小鼠购自新疆医科大学动物中心。新疆野生和栽培荒漠肉苁蓉（市售）。

石油醚、三氯甲烷、正丁醇、蒽酮、葡萄糖、松果菊苷等均为分析纯，流式抗体：PE-CD11c、APC-CD86/FITC- MHCII购自美国BD公司，其它试剂均为进口或国产分析纯。

721型全波长分光光度计：上海第三分析仪器厂；RE-52A旋转蒸发仪：上海亚荣生化仪器厂；78-1磁力加热搅拌器：金坛市医疗仪器厂；A L204电子天平：梅特勒一托利多仪器有限公司，精度0.1 mg；流式细胞仪：美国BD公司。

水提物的制备采用超声结合水提醇沉的方法。步骤如下：取新疆野生及栽培荒漠肉苁蓉粉末，加入10倍体积的石油醚超声辅助脱脂；加入10倍体积无水乙醇超声辅助脱色；加入10倍体积蒸馏水37℃超声两次，4 000 r/min离心10 min，合并上清，真空旋蒸浓缩；加入4倍体积的无水乙醇，4℃过夜醇沉；真空抽滤烘干，得粗提物粉末；加入100倍体积蒸馏水磁力搅拌器使其充分溶解，加入Sevag试剂（氯仿∶正丁醇=4∶1）除蛋白，4 000 r/min离心10 min，重复多次，直到无乳白色变性蛋白吸出为止，收集上清，真空旋蒸浓缩，以同样的方法醇沉，即得新疆野生及栽培疆荒漠肉苁蓉水提物。

醇提物的制备选择超声醇提法制备。步骤如下：新疆野生及栽培荒漠肉苁蓉粉末，以相同条件用石油醚脱脂后烘干，加入80%乙醇（料液比为1∶10），真空旋蒸，65℃烘干得到醇提物，助溶剂（Tween-20∶0.9% NaCl=1∶9）（V/V）溶解醇提物。

采用蒽酮-硫酸法检测水提物中多糖含量。步骤如下：以葡萄糖为标准品绘制标准曲线，精密称取葡糖糖用蒸馏水溶解，浓度调整为0.5 mg/mL，分别加入上述溶液0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9和1.0 mL，再加入8 mL 0.2%蒽酮-硫酸溶液，沸水浴10 min，检测OD625 nm值，得回归方程：A=0.8022C+0.0632，r=0.9954。样品以相同方式处理，根据标准曲线方程计算多糖含量及得率：

其中，M1代表样品经过脱脂、脱色、水提浓缩、醇沉后的质量（g），M0代表提取前样品的质量（g），C代表样品中多糖含量（mg/mL），N代表样品稀释倍数，V代表样品体积（mL），M代表含量测定时样品的质量（g）。

采用Al（NO3）3-NaNO2-NaOH显示体系检测醇提物中苯乙醇苷类化合物含量。步骤如下：以松果菊苷为标准品绘制标准曲线，甲醇溶液溶解松果菊苷，将浓度调整为0.43 mg/mL，等比列稀释标准品，分别加入上述溶液0、20、40、60、80、100、120、140、160、180和200 μL，加入100 μL 5%硝酸钠溶液，室温静置6 min，加入10%硝酸铝静置6 min，加入10%氢氧化钠静置18 min，检测OD510 nm值，得回归方程：A=0.0759C+0.0436，r= 0.9968。以同样的方式处理样品，根据标准曲线方程计算苯乙醇苷类化合物含量及得率：

其中，M1代表经过脱脂、醇提浓缩后的质量（g），M0代表提取前样品的质量（g），C代表待测样中苯乙醇苷类化合物含量（mg/mL），N代表样品的稀释倍数，M代表含量测定样品的质量（g）。

野生荒漠肉苁蓉水提物（Aqueous extracts of wild C. deserticola，AEWCD）、栽培荒漠肉苁蓉水提物（Aqueous extracts of cultivated C. deserticola，AECCD）、野生醇提物（Ethanol extract of wild C. deserticola，EEWCD）、栽培醇提物（Ethanol extract of cultivated C.deserticola，EECCD）分别选用50 μg和200 μg两个剂量免疫小鼠。随机将BALB/c小鼠分成11组：阴性对照组（0.9% NaCl、Tween-20）、阳性对照组（LPS 100 ng）、AEWCD 50 μg、AEWCD 200 μg、AECCD 50 μg、AECCD 200 μg、EEWCD 50 μg、EEWCD 200 μg、EECCD 50 μg和EECCD 200 μg实验组，每组6只，脚掌免疫小鼠，每只50 μL。

采用FlowJo 7.6 软件处理流式细胞术检测结果，GraphPad Prism 5.0进行分析，计量数据均采用平均数±标准差，数据进行单因素方差分析和多组均数间比较，差异显著标准为P