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【实验（一）

题目】

普通光学显微镜的使用，单染色及革兰氏染色

【实验目的】

1. 

学习并掌握显微镜的结构功能和使用。

2.

学习微生物涂片、染色的基本技术。

3.

学习掌握革兰氏染色法。

4.

初步认识细菌的显微形态。

【实验器材】

1

、

菌种：

金黄色葡萄球菌（

G+

）、大肠杆菌（

G-

）、枯草芽孢杆菌以及自选菌种两种

 2

、溶液和试剂：

 a) 

草酸铵结晶紫染液、番红复染液等各种染料以及碘液、

95%

乙醇、无菌水等

 b) 

香柏油、二甲苯

3

、

仪器及其它用品：

普通光学显微镜、擦镜纸、绸布、酒精灯、载玻片、接种针、培养皿等

【实验原理】

A

、普通显微镜的基本原理

 1

、基本原理

现代普通光学显微镜利用目镜和

物镜两组透镜系统来昂达成像，故又

称为复式显微镜。它们包括机械部分

和光学部分两部分。机械部分包括镜

座、镜臂、镜筒、载物台、物镜转换

器、粗调节螺旋、细调节螺旋、标本

夹等。光学部分包括接目镜、接物

镜、反光镜、光圈（虹采）、聚光镜

（集光器）等。

显微镜的放大效能（分辨率）是

由所用光波长短和物镜数值口径决

定，缩短使用的光波波长或增加数值

口径可以提高分辨率，可见光的光波

幅度比较窄，紫外光波长短可以提高分辨率，但不能用肉眼直接观察。所以利用减小光波长

来提高光学显微镜分辨率是有限的，提高数值口径是提高分辨率的理想措施。要增加数值口

径，可以提高介质折射率，当空气为介质时折射率为

1

，而香柏油的折射

率为

1.51

，和载

片玻璃的折射率（

1.52

）相近，这样光线可以不发生折射而直接通过载片、香柏油进入物

镜，从而提高分辨率。显微镜总的放大倍数是目镜和物镜放大倍数的乘积，而物镜的放大倍

数越高，分辨率越高。

2

、油镜

微生物学使用的显微镜的物镜通常有低倍镜（

10

×）、高倍镜（

40

×）和油

镜（

100

×），油镜是三者中放大倍数最大的，油镜的焦距和工作距离最短，油镜与其他物

镜不同的是载玻片与物镜之间隔的不是一层空气（干燥系），而是一层油脂，称为“油浸

系”。由于香柏油与玻璃的折光率相似（香柏油为

1.515

，玻璃为

1.52

）。镜检时，滴加香