实验一小白鼠和家兔的捉持与给药方法

1、小白鼠和家兔的捉持与给药方法

[目的]学习小白鼠的捉持和各种给药法。

[材料]小白鼠3-4只鼠笼天平注射器灌胃针头生理盐水小鼠尾静脉注射用固定筒

[方法]1.1、捉持法以右手提鼠尾，将小鼠放于粗糙面上，将鼠尾轻轻向后拉，以左手的拇指及其食指捏双耳及头部皮肤，无名指、小指及掌心夹其背部皮肤及其尾部，便可

将小鼠固定。

1.2、灌胃左手持小鼠，使腹部朝上，颈部拉直，右手拿灌胃器子口交插入口腔，从舌面紧

沿上颚进入食道。若遇阻力，应退出后再插。

1.3、皮下注射一人抓小白鼠头部皮肤，右手拉鼠尾，另一人左手捏背部皮肤，右手持注射

器刺入背部皮肤。

1.4、腹腔注射左手抓小白鼠，右手持注射器。取30o将针头从下腹部刺入腹腔。

1.5、尾静脉注射将小白鼠置于固定筒内或倒置的大漏斗下，使鼠尾露出在外。用酒精棉球

擦鼠尾，使血管扩张。左手拉住尾尖，选一条扩张最明显的尾静脉将针头刺入血管，推药。若有阻力，且局部变白，则需从新刺入血管。

2、家兔的捉持与给药方法

[目的]学习家兔的捉持和各种给药法。

[材料]家兔1-2只兔开口器注射器导尿管生理盐水磅秤兔固定箱

[方法]1.1、捉持法一手抓家兔颈背部皮肤，将兔提起。另一手托起臀部，使兔成坐位姿势。

1.2灌胃需由两人合作进行。一人取坐位，用两腿夹持兔身，左手握家兔双耳，右手抓住

两前肢。另一人将木制开口器横插家兔口内，压住舌头，并固定之。取8号导尿管从开口器中小口插入食道。插管时易误入气管。区别之法主要在于谨慎观察插管后动物的反应。插入器官是可引起剧烈挣扎和呼吸困难。也可将导尿管的外段进入水中，如有气泡吹出，表示插在气管内，此时应该把管重插。于判明导尿管确实插在食道内以后，取注射器接在导尿管上，将药液推入。再推注少量空气，是导尿管中

不致有药液残留，慢慢抽出导尿管，取出开口器。家兔灌胃给药时的药液量一般为5~20ml\kg.试以生理盐水进行练习。

1.3皮下、肌内及腹腔注射给药方法基本上同小白鼠，为针头可稍大（选用6号或7号针

头），给药量可稍多（皮下与肌内0.5~1.0ml\kg，腹腔1.0~5.0ml\kg）

1.4静脉注射将家兔置固定箱内，把去耳壳外缘的毛，选择一条比较明显的耳缘静脉，用

酒精棉球涂擦皮肤，使血管显露。用左手拇指和中指捏住兔的耳尖部，食指垫在兔耳注射处的下面，右手持注射器（选用6号针头），从近耳尖处将针头刺入血管。如见到针头确在血管内，即以左手使针头和兔耳固定，将药液推入，如推注时有阻力，局部发生肿胀，表明针头不在血管内，应立即拔针，重新穿刺。家兔的静脉注射量一般药液为0.2~2.0ml\kg，等渗药液可达10ml\kg。试以生理盐水进行练习。

实验二药物的镇痛作用（小鼠扭体罚法）

[目的]了解用腹腔注射刺激性物质，引起扭体反应，来筛选镇痛药的方法

[材料]小白鼠3只天平注射器小鼠笼1%盐酸吗啡溶液4%阿司匹林混悬液1%酒石酸锑钾溶液生理盐水

[方法]取小白鼠3只，编号，称记体重。甲鼠皮下注射盐酸吗啡0.15mg\10g（0.1%溶液

0.15ml\10g），乙鼠灌胃阿司匹林6mg\10g（4%混悬液0.15ml\10g），丙鼠灌胃

生理盐水0.15mg\10g。半小时后，隔数分别腹腔注射酒石酸锑钾1ml\10g（1%溶液

0.1ml\10g），观察十五分钟内各鼠有无扭体反应出现。扭体反应的表现为腹部收缩，

躯体扭曲、后肢伸展及蠕行等。汇集全实验室的结果，评价两药的镇痛作用。

实验三药物的抗电惊厥作用及氯丙嗪对大鼠激怒反应的影响[目的]观察氯丙嗪的安定作用

[方法]应用机械刺激法

[药品]1%氯丙嗪溶液10ml大组共用NS10ml

[器材]大白鼠笼2个台秤1个止血钳4把1ml注射器2支棉手套2双

[动物]雄性大白鼠300克以上4只

[方法]1.取异笼喂养大的白鼠4只，称重后配对，分A、B两对，配对大鼠体重应相等，然后分别将两对大鼠放入鼠笼中，以止血钳夹两只大白鼠的尾部（距尾尖1\3处）

反复几次，以疼痛刺激引起大鼠的激怒状态（两鼠竖立，对峙两前只互打，怒叫），

一般此状态可持续1h.

2.组大鼠腹腔注射1%氯丙嗪0.2ml\100g体重，给予同剂量NS的作对照。

3.给药15分钟后再以上述方法刺激两鼠尾部，观察两对大白鼠给药前后反应有何不

同？

实验四敌百虫急性LD50的测定

[目的]项）通过实验了解测定药物LD50的方法、步骤和计算过程

[材料]小白鼠30~50只（体重17~25g，雌雄均可，应注明性别）注射器及针头小鼠丝笼2%敌百虫溶液苦味酸溶液

[方法]1、探索剂量范围取小白鼠8-10只，以两只为一组，分成4-5组，选择组距较大的一系列剂量，分别按组腹腔注射敌百虫溶液，观察出现的症状，并记录死亡数，

找出引起0%及100%死亡率剂量的所在范围，（参考剂量：最小300mg\kg，最

大1000mg\kg）。

2.进行正式实验在预出实验所获得的0%和100%致死量的范围内，选用几个剂量（一般用

3~5个剂量，按等比级数增减，相邻剂量之间呈1：0.8或1：0.7之比），尽可能

使半数组的死亡率都在50%以上，另半数组的死亡率都在50%以下。各组动物的

只数应相等或相差无几，每组10只左右，动物的体重和性别要分层随机分配。完

成动物分组和剂量计算后按组腹腔注射给药。最好先从中剂量组开始，以便能从最

初几组动物接受药物后的反应来判断两端的剂量是否合适，否则可随时进行调整。

3．统计实验结果给药后经一定时间，清点各组的死亡小鼠数。用简化机率单位法及寇氏法计算敌百虫的LD50，包括可信限

与可信限率（计算方法详见本书第八章第九节半数效量法

实验五硫酸链霉素的急性中毒及解救

[目的]观察硫酸链霉素的急性中毒症状，了解其解救方法

[材料]家兔2只人工呼吸机剪刀注射器棉球25%硫酸链霉素溶液10%葡萄糖酸钙溶液

0.05%甲基硫酸新斯的明溶液

[方法]射及四取家兔2只，编号，称体重，观察动物的呼吸情况，翻正反肢肌张力。甲兔耳静脉注射硫酸链霉素0.4g\kg（25%溶液1.6ml\kg），观察其反应。当出现呼吸麻痹时，将与人工呼吸机的出气口相连的橡皮导管插入家兔的一侧鼻孔，连续给予人工呼吸，观察其能否恢复。

乙兔耳静脉注射硫酸链霉素0.4g\kg（25%溶液1.6ml\kg），呼吸麻痹后同样通过鼻导管给予人工呼吸，并静脉注射葡萄糖酸钙250mg\kg（10%溶液2.5ml\kg）及甲基硫酸新斯的明0.15mg\kg（0.05%溶液0.3ml\kg），观察其能否恢复。

实验六胰岛素的过量反应及解救

[目的]观察胰岛素过量引起的低血糖反应及葡萄糖的抢救效果

[材料]小白鼠2只注射器玻皿5u\m胰岛素溶液25%葡萄糖溶液

[方法]将恒温器调节于37~38℃。取预先停食12小时的小白鼠2只，称重。给每鼠腹腔注射胰岛素1.0u\10g，将其放置于恒温器内，盖以玻皿（勿完全密闭），观察小

白鼠的活动变化。当其发生惊厥时，迅速取出一鼠，将预先准备好的25%葡萄糖

溶液0.5ml注入腹腔内。另一鼠不做处理作为对照。比较两鼠的最后结果。

实验七利尿药和脱水药对家兔尿量的影响

[目的]了解急性利尿实验方法，观察高渗葡萄糖注射液和速尿对不麻醉兔的利尿作用[材料]家兔（雄性，2kg以上）2只兔手术台10号导尿管量筒烧杯兔灌胃器注射器1%速尿（或2%利尿酸钠）溶液50%葡萄糖注射液生理盐水液体石蜡

[方法]取雄兔2只，称重，分别用胃管灌入温水40ml\kg。30min后，背位固定于手术台上。将10号导尿管尖端用液体石蜡润滑后自尿道轻而慢的插入，导尿管通过

膀胱括约肌进入膀胱后，即有尿液滴出，再插入1~2cm（共插入约8~12cm），

用胶布将导尿管与兔体固定。将最初5min内滴出的尿液弃去不计。滴速稳定后，

再导尿管下接一量筒，收集20min内滴出的尿液，计其ml数，作为给药前的对

照值。然后分别给两兔给药，并量计给药后20min内的尿量：

甲兔静脉注射50%葡萄糖注射液5ml\kg

乙兔静脉注射速尿4mg\jg（1%溶液0.4ml\kg）或利尿酸钠6mg\kg（2%溶液0.3ml\kg）比较两兔给药前后排除尿量的变化

实验八传出神经药物对离体兔肠的作用

[目的]学习离体平滑肌器官的实验方法，观察拟胆碱药和抗胆碱药对离体兔肠的作用[材料]家兔一只麦(Magnus)氏浴槽恒温水浴L形通气管温度计充气球胆记纹鼓铁支架描记杠杆弹簧夹螺旋夹双凹夹粗剪刀手术剪眼科镊下口瓶(500mi)量筒注射器烧杯

培养皿缝针棉线胶泥台(Tyrode)氏液10-5氯化乙酰胆碱溶液0.1%硫酸阿托品溶

液1%硫酸阿托品溶液1%氯化钡溶液

[方法]1.取制肠段标本取空腹家兔一只，左手执髂上部，右手握木棰，猛击枕骨部致死。

迅速开腹，自幽门下6处剪取回肠，剪成长约2的小段，放入盛有台氏液的培养

皿内备用。

2.装于麦氏浴槽再肠段两端用缝针各穿一线，将肠段的一端系在通气管的小钩上。将通气

管连同肠段放入38±0.5℃台氏液的麦氏浴槽内（台氏液量约30ml），以双凹夹将

通气管的另一端固定在铁支架上，使充满空气的球胆和通气管相连，微微开启球

胆橡皮管上的螺旋夹，使球胆内的空气以2个气泡\s的速度从通气管尖端的小孔

逸出，供给肠肌以氧气。

3.平衡描记杠杆用胶泥将系于肠段另一端的棉线固定在描记杠杆上。描记杠杆的笔尖端

应有足够长度，使肠段收缩在描图上放大4~5倍。再在描记杠杆的笔尖端添加小

团胶泥，使浴槽中的肠段承受0.5~1.0g的拉力。开动记纹鼓，记录一段正常收缩

曲线，然后依次用药。

（1）.加10-5氯化乙酰胆碱0.1ml，结果如何？当肠段收缩明显时，立即加入：（2）0.1%硫酸阿托品溶0.1ml，观察对肠段收缩的影响。描笔下降到基线时再加入：（3）10-5氯化乙酰胆碱溶液，剂量同（1），结果又如何？如作用不明显，接着追加：（4）10-5氯化乙酰胆碱溶液1ml，此时肠段有无收缩？观察3min后更换浴槽中的台氏液3次，待肠段又有轻微收缩后在加入：

（5）1%氯化钡溶液0.5ml，肠段有何反应？作用达稳定状态后立即加入：

（6）0.1%硫酸阿托品溶液，剂量同（2），结果如何？如未能使肠段松弛，再追加：（7）1%硫酸阿托品溶液1.0ml，结果又如何？

实验九强心甙对离体蛙心的作用（八木氏法）

[目的]学习八木氏蛙心灌流法，观察强心甙对离体蛙心收缩强度、频率、节律和心输出量的影响。

[材料]蛙或蟾蜍（70g以上）2只手术器械蛙板探针八木氏蛙心插管蛙心夹描记杠杆铁支架双凹夹长柄木夹记纹鼓小烧杯滴管棉线任氏液低钙任氏液（其中Cacl2含量为

一般任氏液的1\4）5%洋地黄溶液（或0.1%毒毛旋花子甙G溶液）安瓿浓度：

0.025g\ml

[方法]1.取蛙或蟾蜍1只，用探针毁脑及脊髓，背位置于蛙板上。剪开胸部皮肤，剪去胸部肌肉及胸骨，剪破心包膜，暴露心脏。

2.用线结扎右主动脉，于左主动脉下穿一线，打一松结，备结扎动静脉插管之用。再于左

右主动脉下穿一线，把心脏向上翻转后，将该线打一松结，备结扎静脉插管之用。

于下腔静脉处剪一V形口，插入充有任氏液的静脉插管，连同近旁的其他血管一

起结扎固定，冲洗心脏内血液。然后在左主动脉上剪一V形口，插入动脉插管并

结扎。用剪刀剪断动、静脉，使心脏离体。先使含血任氏液从动脉插管流出，用

滴管在静脉插管中添加任氏液。当从动脉插管流出的液体接近无色时，使静脉插

管承接动脉插管的流出液。动脉插管的液柱高度约为5cm，静脉插管的液柱高度

约为2.5cm

3.用带有长线的蛙心夹夹住心尖，将长线系在描记杠杆上，再杠杆上加适量胶泥，调节心脏

负荷，将心脏的搏动记录在记纹鼓上。

4.记录一段正常心搏曲线后，依次换加下列药液。

（1）换入低钙任氏液。

（2）当心脏收缩明显减弱时，向静脉插管内加入5%洋地黄溶液0.1~0.2ml（或0.1%毒毛旋花子甙G溶液0.2ml）。或针剂0.45ml。

比较给药前后心脏收缩的强度、频率以及从动脉插管搏出液体的流速（滴\min）

药理实验报告 一、实验目的 1. 研究不同剂量的戊巴比妥对小白鼠作用的效果的不同。 2. 研究不同的给药途径的对小白鼠作用效果的不同。 二、实验原理 1. 药物剂量的大小决定血药浓度的高低，血药浓度又决定药理效应，因此药物剂量决定药理用强弱。 2. 给药途径不同，吸收速度有差别，药物反应的潜伏期和程度亦有差别，一般是腹腔大于皮下大于灌胃的药效。 实验一剂量对药物作用的影响 三、实验材料 Mice 18-22g，2只/组鼠称、苦味酸、1mL注射器、生理盐水、戊巴比妥 0.2%、0.4%、0.8%戊巴比妥钠溶液四、实验步骤 1、每组取性别相同，体重相近的小鼠2只，承重、编号； 2、分别i.p0.2%、0.4%、0.8%戊巴比妥钠溶液0.1mL/10g； 3、给药后仔细观察小鼠活动情况，并记录在表1； 4、实验结束后，对全班实验结果进行统计分析，得出结论并分析实验结果。五、实验结果及分析 2、表2 剂量对药物作用的影响 p 以上实验结果说明，不同剂量的戊巴比妥对小白鼠作用的效果不同。 3、本组实验结果与全班实验结果对比——潜伏期

六、思考 1、了解药物剂量与作用的关系及其临床意义。 答：剂量－效应关系药理效应与剂量在一定范围内成比例关系。由于药理效应与血药浓度的关系较为密切，所以在药理学研究中常用浓度－效应关系。 在剂量－效应关系中，纵坐标：表示效应的强弱；横坐标：表示药物浓度对称曲线。量效曲线说明量效关系存在以下四个规律： 1、药物必须达到一定的剂量才能产生效应。 2、在一定范围内剂量增加，效应增加。 3、效应的增加不是无限的。 4、量效曲线的对称点在50%处，对剂量的变化反应最为灵敏。 量反应是指药理效应强弱是连续增减的量变。例如：血压的升降，平滑肌的舒缩等，用具体数量或最大反应的百分率表示。 质反应是指药理效应只能用全或无，阳性或阴性表示。例如：死亡与生存、抽搐与不抽搐等，必需用多个动物或多个实验标本以阳性率表示。从量效曲线可以看到下列几个特定的位点： 最小有效浓度即刚能引起效应的阈浓度 半数有效量是能引起50%阳性反应或50%最大效应的浓度 如：ED50：半数有效剂量 EC50：半数有效浓度 TC50：半数中毒浓度 TD50：半数中毒剂量 LC50：半数致死浓度 LD50：半数致死剂量 最大效能继续增加浓度或剂量而效应量不再继续上升，即药物产

《药理学》实验讲义

实验一药理学实验的基本知识和基本技术 一、目的 1. 掌握基本操作，锻炼动手、动脑能力； 2. 更好地掌握药理学基本理论知识； 3. 培养科学思维 二、基本要求 1. 实验前：预习实验内容并复习相关理论知识； 2. 实验时 ⑴实验器材要妥善保管； ⑵实验操作按步骤进行，仔细观察实验中出现的现象，实事求是地做好记录； ⑶注意节约实验药品； ⑷维持良好的课堂纪律。 3. 实验后 ⑴各组同学将实验动物处死，实验台擦干净，将实验方盘送回准备室； ⑵值日生搞好实验室卫生，将死亡动物送至指定场所； ⑶书写实验报告。 三、实验报告的书写 1. 题目 2. 目的 3. 原理 4. 材料：实验动物，器材，药品 5. 方法：用自己的语言简单扼要描述出来； 6. 结果：要求真实、清楚； 7. 讨论：将实验结果进行比较、分析；实验中有哪些不足之处；结果异常或失败的原因； 8. 结论：将实验结果进行归纳总结，应带有提示性质。 四、药理学实验实验设计原则 1.随机原则 按照机遇均等的原则进行分组。其目的是使一切干扰因素造成的实验误差减少，而不受实验者主观因素或其他偏性误差的影响。 2.对照原则 空白对照（指在不加任何处理的条件下进行观察对照）；阴性对照也称假处理对照（给予生理盐水或不含药物的溶媒）；阳性对照也称标准对照（指以已知经典药物在标准条件下与实验药进行对照）。 3.重复原则 能在类似的条件下，把实验结果重复出来，才能算是可靠的实验，重复实验除增加可靠性外，也可以了解实验变异情况。 五、实验动物

1. 动物的选择 （1）小白鼠：适用于需大量动物的实验，如某些药物的筛选，半数致死量的测定。也较适用于避孕药实验、抗炎镇痛药实验、中枢神经系统药实验、抗肿瘤药及抗衰老药实验等。 （2）大白鼠：比较适用于抗炎药物实验，血压测定、利胆、利尿药实验，也可用于进行亚急性和慢性毒性实验。 （3）豚鼠：因其对组胺敏感，并易于致敏，故常被选用于抗过敏药、平喘药和抗组胺药的实验。也常用于离体心脏、心房、肠管实验。又因它对结核敏感，常用于抗结核病药的实验。 （4）家兔：常用于观察研究脑电生理作用，药物对小肠的作用。由于家兔体温变化敏感，也常用于体温实验，用于热原检查。 （5）狗：狗是记录血压，呼吸最常用的大动物。还可利用狗做成胃瘘、肠瘘，以观察药物对胃肠蠕动和分泌的影响。在进行慢性毒性实验时，也常采用狗。2. 实验动物的编号 狗、兔等较大的动物可用特制的铝质号码牌固定在颈部或耳上。大鼠、小鼠如为白色可用黄色苦味酸在不同的体表标志上标记。 3. 动物固定及给药 （1）小鼠捉拿 小鼠性情较温顺，一般不会咬人，比较容易抓取固定。通常用右手提起小鼠尾巴将其放在鼠笼盖或其它粗糙表面上，在小鼠向前挣扎爬行时，用左手拇指和食指捏住其双耳及颈部皮肤，将小鼠置于左手掌心、无名指和小指夹其背部皮肤和尾部，即可将小鼠完全固定。在一些特殊的实验中，如进行尾静脉注射时，可使用特殊的固定装置进行固定，如尾静脉注射架或专用小鼠固定筒。如要进行手术或心脏采血应先行麻醉再操作，如进行解剖实验则必须先行无痛处死后再进行。 （2）小鼠灌胃 用左手固定鼠，右手持灌胃器，将灌胃针从鼠的口腔插入，压迫鼠的头部，使口腔与食道成一直线,将灌胃针沿咽后壁慢慢插入食道，可感到轻微的阻力,此时可略改变一下灌胃针方向，以刺激引起吞咽动作，顺势将药液注入。一般灌胃针插入小鼠深度为3～4cm，大鼠或豚鼠为4～6cm。常用灌胃量小鼠为0.2～1ml,大鼠1～4ml,豚鼠1～5ml。 （3）小鼠腹腔注射 先将动物固定,腹部用酒精棉球擦试消毒，然后在左或右侧腹部将针头刺入皮下，沿皮下向前推进约0.5 厘米，再使针头与皮肤呈45 度角方向穿过腹肌刺入腹腔，此时有落空感，回抽无肠液、尿液后，缓缓推入药液。此法大小鼠用的较多。 （4）皮下注射 注射时用左手拇指及食指轻轻捏起皮肤，右手持注射器将针头刺入,固定后

药理学实验方案

元胡止痛片对小鼠镇痛抗炎镇痛活性研究 ——药理实验设计 设计人：级药学一班 张礼杰 515010 信盼 515024 陈茂琴 515026 何朵朵 515028 药学四班 杨森 515101 冯禹 515110 王同月 515102

元胡止痛片中抗炎和镇痛作用研究 1.实验目的：探讨元胡止痛片的镇痛和抗炎作用 2.实验原理：（1）元胡止痛片收载于《元胡止痛片收载于《中国药典》是由元胡、白芷两味药组成的中药复方制剂为行气活血止痛剂临床用于治疗气滞血瘀胃痛、胁痛、头痛及月经痛等症疗效确切。本实验是为验证元胡止痛片的镇痛和抗炎作用进行验证。实验对四川禾邦阳光制药厂家生产元胡止痛片不同剂量进行了药效学研究采用小鼠醋酸扭体法、小鼠热板法和耳肿胀法实验分别测定小鼠扭体反应抑制率、小鼠痛阂值提高率和肿胀率从而确定不同剂量的镇痛和抗炎作用效果。 在基础医学研究中筛选镇痛药的常见致痛方法概括有物理法（热、电、机械）和化学法。动物的疼痛反应常表现出嘶叫、舔足、翘尾、蹦跳及皮肤、肌肉抽搐。化学法，即将某些化学物质，如强酸、强碱、钾离子、缓激肽等，涂布于动物的的某些敏感部位或腹腔注射。腹腔注射损伤物质引起受试动物腹痛，动物表现出“扭体反应”（即腹部内凹、躯干与后肢伸张、臀部高起）。 3.实验方法 :使用小鼠热板法、醋酸扭体法、耳肿胀法 ,并分别建立小鼠疼痛和炎症模型 ,灌胃给予不同剂量元胡止痛片配成的溶液，观察对动物的镇痛和抗炎作用。 4.实验过程： 1.内容

4.1 药品与试剂 元胡止痛片：四川禾邦阳光制药股份有限公司，国药准字z51021658，规格：片芯重0.25g,12片 阿司匹林: 浙江金华市第三制药厂, 国药准字: H13023716, 临用前用蒸馏水配制为适当浓度的混悬液。 4.2动物：健康昆明种小白鼠，雌性，32只 4.3 器材：数控超级恒温槽，烧杯、1ml 注射器、电子秤 4.4分组： 空白对照组 (灌胃0.9%生理盐水 10 mL/kg) 元胡止痛片高、低剂量组 (0.2，0.4mg ／10g) 阳性药阿司匹林对照组 (灌胃阿司匹林 0. 4 g/kg) 4.5人和动物剂量换算公式 小白鼠=20 0026 .0?人/g 2 方法 （1）热板法 1.动物筛选：致痛潜伏期 (痛阈值)为 5~30s 之间的合格雌性小鼠。32只，热板法镇痛试验筛选痛阈值合格的小鼠，取♀小鼠于给药前先用热板仪于55 ± 0． 5 ℃分别测定每只小鼠的正常痛阈值［将小鼠放于智能热板仪上至出现舔后足的所需时间作为痛阈值( s) ，连续 2 次，间隔30 s ，测定平均值即为正常痛阈值］。将舔后足时间＜ 5 s 或＞30 s ，或跳跃者不用于此实验

3.4 实验动物的给药方法 3.4.1 经口投药法 (1) 口服法． 口服法是将能溶于水并且在水溶液中较稳定的药物放入动物饮水中，不溶于水的药物混于动物饲料内，由动物自行摄入。该方法技术简单，给药时动物接近自然状态，不会引起动物应激反应，适用于多数动物慢性药物干预实验，如抗高血压药物的药效、药物毒性测试等。其缺点是动物饮水和进食过程中，总有部分药物损失，药物摄入量计算不准确，而且由于动物本身状态、饮水量和摄食不同，药物摄入量不易保证，影响药物作用分析的准确性。 (2) 灌服法 灌服法是将动物适当固定，强迫动物摄入药物。这种方法能准确把握给药时间和剂量，及时观察动物的反应，适合于急性和慢性动物实验，但经常强制性操作易引起动物不良生理反应，甚至操作不当引起动物死亡。故应熟练掌握该项技术。强制性给药方法主要有两种： ①固体药物口服 一人操作时用左手从背部抓住动物头部，同时以拇、食指压迫动物口角部位使其张口，右手用镊子夹住药片放于动物舌根部位，然后让动物闭口吞咽下药物。 ②液体药物灌服 小白鼠与大白鼠一般由一人操作，左手捏持小白鼠头、颈、背部皮肤，或握住大白鼠以固定动物，使动物腹部朝向术者，右手将连接注射器的硬质胃管由口角处插入口腔，用胃管将动物头部稍向背侧压迫，使口腔与食管成一直线，将胃管沿上颚壁轻轻插入食道，小白鼠一般用3 cm，大白鼠一般用5 cm的胃管(图3.4-1)。插管时应注意动物反应，如插入顺利，动物安静，呼吸正常，可注入药物；如动物剧烈挣扎或插入有阻力，应拔出胃管重插，如将药物灌入气管，可致动物立即死亡。 给家兔灌服时宜用兔固定箱或由两人操作。助手取坐位，用两腿夹住动物腰腹部，左手抓免双耳，右手握持前肢，以固定动物；术者将木制开口器横插入兔口内并压住舌头，将胃管经开口器中央小孔沿上腭壁插入食道约15 cm，将胃管外口置一杯水中，看是否有气泡冒出，检测是否插入气管，确定胃管不在气管后，即可注入药物(图3.4-2)。 3.4.2 注射给药

药理学 实 验 指 导 邵阳医专药理学教研室

前言 药理学既是理论科学，又是实践科学。药理学实验课是药理学教学的一个重要组成部分。它的目的一方面是验证理论，巩固并加强对理论知识的理解；另一方面是学习和掌握药效学与药代动力学实验的基本操作方法和技能，培养学生对科学工作严肃的态度，严密的方法、严格的要求及科学的思维方式，学习实验设计及实验数据统计处理的有关知识，初步具备客观地对药理学实验现象进行观察、比较分析、综合和解决实际问题的能力。从而更深入、准确地理解和掌握药理学基本知识，指导临床合理用药；并为研究开发新药、发现药物新用途，为其他生命科学的研究探索奠定初步基础。 一、药理实验注意事项 实验前①仔细阅读实验指导，了解实验的目的、要求、方法和操作步骤，领会其设计原理；②结合实验内容，复习有关药理学和生理学、生化学等方面的理论知识，达到充分理解；③估计实验中可能出现的情况和发生的问题。 实验时①严格按照实验指导上的步骤进行操作，准确计算给药量，防止出现差错造成实验失败；②认真、细致地观察实验过程中出现的现象，随时记录药物反应的出现时间、表现以及最后结果，联系理论内容进行思考；③实验过程中要注意节约药品及实验材料，避免造成浪费。 实验后①认真整理实验结果，经过分析思考，写出报告，按时交给指导教师；②整理实验器材，洗净擦干，妥为安放。将实验后的动物按要求放到指定地点，课后认真做好实验室的清洁卫生工作。 二、实验报告的书写： 每次实验后应写好实验报告，交给实验教师批阅。实验报告要求结构完整、条理分明、文字简练、书写工整，措辞应注意科学性和逻辑性。 实验报告一搬包括下列几项内容： ①实验题目与日期 ②实验目的实验的意义所在，要做什么，用什么方法，达到什么目的 ③实验材料包括动物、实验药品、主要使用仪器、也包括手术器材、玻璃器材等的数量，及实验条件。 ④实验方法步骤要清晰、使别人能看懂、能重复。如果实验方法临时有变更，或者由于操作技术方面的原因影响观察结果时，应做简要说明。 ⑤实验结果可用文字，也可表格或图示多种方法表示，是实验报告中重要的部分，需保证其绝对的真实性。应随时将实验中观察到的现象在记录本上记录，实验告一段落后立即进行整理。不可单凭记忆或将原始记录搁置很久之后再做整理，这样易致实验结果遗漏或错误。实验报告上一般只列经过归纳、整理的结果。但原始记录应保存备查。 ⑥分析讨论应针对实验中所观察到的现象与结果，联系课堂讲授的理论知识，进行分析和讨论。要根据实验内容详细讨论实验结果说明了什么，是否达到实验目的要求和观察到设计的现象；各项指标说明了哪些问题；实验成功或失败的原因，应吸取的经验教训。

常见实验动物的捉持和给药方法 一、小白鼠的捉持和给药方法 1、捉持方法 右手提起鼠尾，放在粗糙物（如鼠笼）上面，轻向后拉其尾；此时小鼠前肢抓住粗糙面不动；用左手拇指和食指捏住双耳及头部皮肤，无名指、小指和掌心夹其背部皮肤及尾部，便可将小鼠完全固定。腾出右手，可以给药。 此外，也可单手捉持，难度较大，但速度快。先用拇指和食指抓住小鼠尾巴，用小指、无名指和手掌压住尾根部，再用腾出的拇指、食指及中指抓住鼠双耳及头部皮肤而固定。 2、给药方法 ａ.灌胃法 小鼠固定后，使腹部朝上，颈部拉直，右手用带灌胃针头的注射器吸取药液（或事先将药液吸好），将针头从口交插入口腔，再从舌背进沿上腭进入食道。若遇阻力，应退出后再插，切不可用力过猛，防止损伤或误入气管导致动物死亡。灌胃量一般不超过0.25ml/10g。

ｂ.腹腔注射法 抓鼠方法同上，右手持注射器（5～6号针头），从耻骨联合上一侧向头端以30度角刺入腹腔（应避开膀胱）。可先刺入皮下2～3mm，再刺入腹腔，以防药液外漏。针头刺入部位不宜太高太深，以免刺破内脏。注射量一般为0.1～0.25ml/10g。 ｃ.皮下注射法 一般两人合作。一人左手抓住小鼠头部皮肤，右手拉住鼠尾；另一人左手提高背部皮肤，右手持住注射器（针头号同上），将针头刺入提起的皮下。若一人操作，左手小指和手掌夹住鼠尾，拇指和食指提起背部皮肤，右手持注射器给药。一般用量为0.05～0.25ml/10g。 ｄ.肌肉注射法 两人合作时，一人抓鼠方法同上，另一人左手拉直一侧后肢，右手持注射器，注射部位多选后腿上部外

侧（针头号同上）。如一人操作，抓鼠方法类似腹腔注射，只是药液注射在肌肉内。每腿的注射量不宜超过0.1ml。 ｅ.尾静脉注射法 将小鼠置于待置的固定筒内，使鼠尾外露，并用酒精或二甲苯棉球涂擦，或插入40℃～50℃温水中浸泡片刻，使尾部血管扩张。左手拉尾，选择扩张最明显的血管；右手持注射器（4～5号针头），将针头刺入血管，缓慢给药。如推注有阻力而且局部变白，说明针头不在血管内，应重新插入。穿刺时宜从近为尖部1/3处静脉开始，以便重复向上移位注射。一般用药量为0.1～0.2ml/10g，不宜超过0.5ml/10g。 二、家兔的捉持和给药方法 1、捉持方法 一般左手抓住兔颈背部皮肤，将其提起，右手托住臀部称坐位姿态。不要抓两耳，以防兔挣扎。 2、给药方法 ａ.耳缘静脉注射法 一人操作时，将兔放入固定箱或试验台上，选好耳缘静脉（在耳背的下缘），拔除局部的毛，用酒精棉球涂擦，并用食指轻弹耳壳，使血管扩张。用左手的食指和中指夹住耳根部，拇指和无名指夹住耳尖部拉直；右手将抽好药液的注射器（6～7号针头）刺入血管，用拇指和食指使针头和兔耳固定，将药液推入。如针头在血管内，推注轻松，并可见血液被药液冲走；如不在血管内，则推注有阻力，耳局部变白或肿胀，应立即拔除重新注射。注射完毕，则用手指或棉球压在针眼上，再拔出针头，并继续按压片刻，防止出血。如两人操作，一人夹住兔子，右手暴露血管，压住耳根部使血管充盈，另一人注射给药。

药理学实验报告 学校： 学院： 班级： 学号： 姓名： 指导老师：

元胡止痛片对小鼠镇痛抗炎镇痛活性研究 组员：指导老师: 摘要：目的：研究元胡止痛片是否具有镇痛抗炎的效果。方法：使用小鼠热板法、醋酸扭体法、耳肿胀法，并分别建立小鼠的镇痛抗炎模型，观察元胡止痛片对小鼠的镇痛抗炎作用的影响。结果：1.热板法：元胡止痛片对小鼠热板法实验中给药60分钟后有显著性差异，阳性药阿司匹林与生理盐水组相比有明显的痛阈降低，低浓度与生理盐水组相比有痛阈降低。2. 醋酸扭体法：实验结果有显著差异，阿司匹林阳性药与高浓度元胡溶液相比有显著性差异，阳性药有明显的镇痛作用。而阿司匹林组与生理盐水，低浓度与生理盐水组没有出现显著性差异。3. 热肿胀法：结果显示无显著性差异，阳性药阿司匹林没有明显的抗炎活性。结论：阿司匹林阳性药有抗炎镇痛作用，元胡止痛片无抗炎镇痛作用。 关键词：元胡止痛片；镇痛；抗炎；热板法；醋酸扭体法；耳肿胀法 元胡止痛片为中药复方制剂，由延胡索(醋制)、白芷等中药组成，延胡索(醋制)具辛、苦、温，归肝脾经，由活血、理气、止痛等功效；白芷辛温，归胃、大肠、肺经，其功能与主治为散风除湿、通窍止痛、消肿排脓。该制剂为中国药典方，临床上用于气滞血淤的胃痛、胁痛、头痛及月经痛等。由于直肠给药50％以上的药物可以不通过肝脏而直接进入血液作用于全身，可避免口服引起的胃肠道刺激，同时减少。胃液和肝脏对药物的破坏和降解，从而提高药效减轻药物的不良反应。另外，直肠给药药物吸收缓慢，可使药效维持较长的时间。本实验旨在对元胡止痛栓的镇痛抗炎作用的研究。 1 材料与方法 1.1 动物健康昆明种小白鼠，体重25±8g，雌性32只，雄性32只。健康昆明种小白鼠，体重40±10g，雄性，32只。 1.2 药品与试剂元胡止痛片，广西半宙天龙制药有限公司，批号130807；0.9%氯化钠注射液，新疆华世丹药业股份有限公司，批号214070702；阿司匹林肠溶片，临汾宝珠制药有限公司，批号140401；二甲苯，天津市富宇精细化工有限公司，批号120411；冰乙酸，天津市光复科技发展有限公司，批号090527。 1.3 仪器YLS-6B智能热板仪，淮北正华生物仪器设备有限公司，出厂日期071018；天孚牌JYT-5架盘药物天平，生产日期2011年8月；YLS-25A电动耳肿打耳器，济南益延科技发展有限公司，出厂日期20140521；电子天平。 2 实验内容 2.1 热板法 2.1.1 动物筛选致痛潜伏期(痛阈值)为5~45s 之间的合格雌性小鼠。32只，热板法镇痛 试验，筛选痛阈值合格的小鼠，取♀小鼠于给药前先用热板仪于55 ±0.5 ℃分别测定每只小鼠的正常痛阈值［将小鼠放于智能热板仪上至出现舔后足的所需时间作为痛阈值( s) ，连续2次，间隔30 s，测定平均值即为正常痛阈值］。将舔后足时间＜5 s 或＞45s，或跳跃者不用于此实验。 2.1.2 分组按体重随机分组，分4组，编号，每组8只。 2.1.3 给药1组生理盐水空白对照组（按0.1mg/10g灌胃生理盐水），2组阿司匹林阳性对照组（按4mg/10g灌胃20mg/ml的阿司匹林），3组元胡止痛片低剂量组（按0.6mg/10g 灌胃2mg/ml的元胡止痛片溶液），4组元胡止痛片高剂量组（按1.3mg/10g灌胃10mg/ml 的元胡止痛片溶液）。 2.1.4 测定痛阈值各鼠给药前测定正常痛阈值。取智能热板仪，调节温度，使温度恒定在55±0．5℃,取每组合格雌性小鼠，按2.1.2灌胃不同药液，测定给药后每组15、30、60、

第一章现代药理学实验方法与技术简介 第一节分子生物学试验方法与技术 分子生物技术在药理学实验中应用较为广泛，包括核酸分子探针的标记、核酸分子杂交、多聚酶链反应、蛋白印迹杂交技术、cDNA文库、随机分子库技术、外核基因在真核细胞中的表达、转基因动物、人类基因治疗等。现将更为常用的技术介绍如下： 一、核酸分子探针的标记标记核酸分子探针（nucleic acid probe）是进行核杂交的基础，根据核酸分子探针的来源及性质进行选择，选择的基本原则是具有高度的特异性，探针选择直接影响杂交结果的分析。根据检测对象和目的不同，，可选择不同的探针种类及标记方法。 ㈠探针种类 1．基因组DNA探针是克隆化的各种基因片断，也是最常用的核酸探针，探针应尽可能选用基因编码（外显子），避免使用内含子及其它非编码序列。 2．cDNA探针与mRNA互补的DNA链称cDNA，是一种较为理想的核酸探针，特异性较高。 3．RNA探针RNA与RNA或DNA杂交体的探针稳定性，特异性高。 4．寡核苷酸探针人工合成寡核苷酸片段做探针，可根据需要合成相应序列。 ㈡标记物 常用的探针标记物有两类：放射性同位素和非放射性同位素。标记物的检测具有高度灵敏性和特异性。标记和探针结合不影响杂交的特异性和稳定性。其中放射性同位素是应用最多的探针标记物，但易造成放射性污染，多数同位素的半衰期短，不能长期存放。常用的放射性同位素有32P?3P?35S，有时也用14C,125I或131I。 二、核酸分子杂交（nucleic acid hybridiazation ）是指具有一定同源序列的两条核酸单链在一定的条件下，按碱基互补配对原则形成异质双链的过程。核酸分子杂交是分子生物学领域应用最广泛的技术，灵敏度高、特异性强，主要用于特异DNA或RNA的定性定量检测。 三、聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）是一种体外酶促扩增特异DNA片段的方法。传统的DNA扩增法是分子克隆法，需经过DNA 酶切、链接、转化等步骤构建含有目的基因的载体。然后导入细胞中进行扩增，再用同位素标记的探针进行筛选，操作复杂，耗时。PCR技术灵敏度

实验1 实验动物的捉持法和给药法 一、常用实验动物的捉持法 1．蛙和蟾蜍 通常以左手握持，用食指和中指夹住左前肢，拇指压住右前肢，右手将下肢拉直，左手用无名指及小指夹住（图1）。 图1 蟾蜍捉持法 2．小鼠 （1）双手法：右手提鼠尾，放在鼠笼盖或其他粗糙面上，向后方轻拉鼠尾，使小鼠前肢固定在粗糙面上。迅速用左手拇指和食指捏其双耳间颈背部皮肤，无名指、小指和掌心夹其背部皮肤和尾部，便可将小鼠牢固捉持（图2）。 图2 小鼠双手捉持法

（2）单手法：小鼠置于笼盖上，先用左手食指和拇指抓住鼠尾，后手掌尺侧和小指夹住鼠尾，然后左手拇指与食指捏住颈部皮肤（图3）。 图3 小鼠单手捉持法 3. 大鼠 大鼠容易激怒咬人，捉持时应戴防护手套。先用右手抓住鼠尾，再用左手拇指和食指握住头部，其余手指与掌部握住背部和腹部。注意不要捏其颈部，以防用力过大、过久，窒息死亡。 4．家兔 一只手抓住兔颈背部皮肤，将兔轻轻提起，另一只手托住臀部，使兔呈蹲坐姿势（图4）。切不可用手握持双耳提起兔子。 图4 家兔捉持法 5．豚鼠 豚鼠性情温和，不咬人，用手轻轻握住身体即可抓起。

6. 猫 应戴好防护手套。轻声呼唤，慢慢将手伸入猫笼，轻抚猫头、颈和背部，一只手抓住颈背部皮肤，另一只手抓住腰背部。性情凶暴的猫可用布袋或网套捉持，操作中应防其利爪和牙齿伤人。 7. 狗 驯服的狗可戴上特制嘴套，用绳带固定于耳后颈部；凶暴的狗可用长柄捕狗夹钳住狗的颈部，然后套上嘴套。狗嘴也可用绳带固定，操作时先将绳带绕过狗嘴的下颌打结，再绕到颈后部打结，以防绳带滑落。狗麻醉后四肢固定于手术台上，取下嘴套或绳带，将一金属棒经两侧嘴角，穿过口腔压于舌上，再用绳带绕过金属棒绑缚狗嘴，并固定于手术台上。应将狗舌拉出口腔，以防窒息。 二、常用实验动物给药法 1. 经口给药法 此法有口服与灌胃两种方法。适用于小鼠、大鼠、豚鼠、兔、犬等动物。口服法可将药物放入饲料或溶于饮水中令动物自由摄取。若为保证剂量准确，可应用灌胃法。 （1）灌胃法 小鼠：左手捉持小鼠，腹部朝上，右手持灌胃管经口角插入口腔，使灌胃管与食管成一直线，再沿上颚壁缓慢插入食管，稍感有阻力时(大约灌胃管插入1／2)，如动物安静，呼吸无异常，即可注入药液。如遇阻力应抽出灌胃管重新插入，若药液误注气管，小鼠可立即死亡。一次灌注药量0.1－0.3ml／10g体重。操作宜轻柔，防止损伤食管（图5）。灌胃管可用粗大的注射针头制作，磨钝针尖制成，管长4-5cm，直径1mm，连接于1-2ml 注射器上即成。 图5 小鼠灌胃法

影响药物作用的因素 一、实验目的 1. 研究不同剂量的戊巴比妥对小白鼠作用的效果的不同。 2. 研究不同的给药途径尼可刹米的对小白鼠作用效果的不同。二、实验原理 1. 药物剂量的大小决定血药浓度的高低，血药浓度又决定药理效应，因此药物剂量决 定药理用强弱。 2. 给药途径不同，吸收速度有差别，药物反应的潜伏期和程度亦有差别，一般是腹腔 大于皮下大于灌胃的药效。 实验一剂量对药物作用的影响 三、实验材料 mice 18-22g，2只/组 鼠称、苦味酸、1ml注射器、生理盐水、戊巴比妥 0.2%、0.4%、0.8%戊巴比妥钠溶液四、 实验步骤 1、每组取性别相同，体重相近的小鼠2只，承重、编号； 2、分别i.p0.2%、0.4%、0.8% 戊巴比妥钠溶液0.1ml/10g（注意注射器勿搞混）； 3、给药后仔细观察小鼠活动情况，并记 录在表1； 4、实验结束后，对全班实验结果进行统计分析，得出结论并分析实验结果（对 本组实验结果及全班实验结果进行分析讨论）。（注：数据统计时注意剔除可疑数据。）五、 实验结果及分析 2、 表2 剂量对药物作用的影响（全班数据） - 1 - ### p