人

FGF-9

慢病毒表达载体的构建、包装及鉴定

眭蕊

;

刘群

;

李锐锐

;

苗劲蔚

【期刊名称】

《中国医药导报》

【年

(

卷

),

期】

2013(10)30

【摘

要】

目的

构建人成纤维细胞生长因子

-9 (FGF-9)

慢病毒表达载体

,

鉴定其表达

,

并对慢病毒载体进行包装

,

为在体及体外研究

FGF-9

的功能及其与肿瘤等疾病的关

系提供基础

.

方法

 PCR

扩增人

FGF-9

基因

.

全长序列交换入线性表达载体

,

连接产物

转化感受态细胞

,PCR

及基因测序鉴定阳性克隆

.

重组质粒转染

293T

细胞

,

荧光显微

镜观察增强型绿色荧光蛋白

(eGFP)

表达

,Western-blot

鉴定

FGF-9

表达

.

重组病毒

质粒在脂质体介导下与结构质粒和包膜质粒共转染

293T

细胞包装成人

FGF-9

过

表达慢病毒

,RT-qPCR

测定滴度

.

结果

 PCR

及测序证实人

FGF-9

基因正确克隆至病

毒质粒

;

感染

293T

细胞后

,

荧光显微镜观察到

eGFP,Western-blot

检测到

FGF-9

融合蛋白表达

;

三质粒共转染

293T

细胞获得慢病毒

,

测其浓度为

2×108TU/mL.结

论

成功构建人

FGF-9

慢病毒表达载体

,

可在

293T

细胞中表达

,

并包装成慢病毒

,

为

在体及体外研究

FGF-9

的功能及其与肿瘤等疾病的关系提供基础

.

【总页数】

4

页

(P16-19)

【作

者】

眭蕊

;

刘群

;

李锐锐

;

苗劲蔚

【作者单位】

首都医科大学附属北京妇产医院

,

北京

 100026;

首都医科大学附属北

京妇产医院

,

北京

 100026;

首都医科大学附属北京妇产医院

,

北京

 100026;

首都医科

大学附属北京妇产医院

,

北京

 100026

【正文语种】

中

文