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作者：

杨燕

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摘要：

目的构建白细胞介素33(IL-33)慢病毒表达载体,包装成病毒颗粒后转染鼠结肠癌细胞株CT26,以便进一步探索IL-33在肿瘤病理生理机制中的作用.方法将鼠IL-33(mIL-33)基因克隆含嘌呤霉素抗性的pLV-CMV慢病毒表达载体中,构建出表达mIL-33的慢病毒表达载体pLV-CMV-IL-33;共转染293T细胞包装病毒,分别收集转染后病毒上清并转染CT26细胞,初次感染72h后开始采用嘌呤霉素筛选稳定株;筛选2周后采用RT-PCR,Western blot及ELISA法验证IL-33上调干扰后mRNA及蛋白的表达水平;构建IL-33稳定上调表达的CT26细胞(CT26-IL-33)及阴性慢病毒对照组细胞(CT26-NC).结果成功构建重组慢病毒表达质粒pLV-CMV-IL-33并包装成慢病毒颗粒,转染CT26细胞株后获得靶基因的稳定高表达.结论成功构建含mIL-33的慢病毒表达载体pLV-CMV-m IL-33,慢病毒系统能有效介导目的基因在鼠结肠癌细胞株CT26中稳定表达,病毒包装成功并能有效转染CT26细胞,为进一步探索IL-33在肿瘤病理生理机制中的作用奠定了基础.

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关键词：

IL-33；结肠癌；CT26；慢病毒载体

学位级别：

硕士

DOI：

CNKI:CDMD:2.1018.034722