Q1：(AnnexinV-FITC)-/PI+，此区域的细胞为坏死细胞。也可能有少数的晚期凋亡细胞在其中，甚至机械损伤的细胞也包含其中。

Q2: (AnnexinV+FITC)+/PI+，此区域的细胞为晚期凋亡细胞。

Q3：(AnnexinV-FITC)+/PI-，此区域的细胞为早期凋亡细胞。

Q4：(AnnexinV-FITC)-/PI-，此区域的细胞为活细胞。

通常统计细胞凋亡率时采用Q2+Q3，晚期凋亡＋早期凋亡群（即所有AnnexinV阳性群）。

细胞周期（Cell Cycle）

细胞周期的检测是流式细胞仪最为广泛的应用之一。细胞周期是指以有丝分裂方式增殖的细胞从亲代分裂结束到子细胞分裂结束所经历的过程。通常由G1期、S期、G2期和M期组成。细胞在G1期完成必要的生长和物质准备，在S期完成染色体DNA的复制，在G2期进行必要的检查和修复，以保证DNA复制的准确性。在M期完成遗传到子细胞中的均等分配，使细胞进行分裂。

细胞周期检测中PI最为常用。PI为插入性核酸荧光染料，能选择性的嵌入核酸DNA和RNA双链螺旋的碱基之间与之结合，其结合的量与DNA的含量成正比例关系，用流式细胞仪进行分析，就可以得到细胞周期各个阶段的DNA分布状态，从而计算出各个期的百分含量。

以cell cycle 文件夹中的5206.001，PI标记为例，设门选取目标细胞群体，将细胞碎片排除在外。即双击工作台中的5206.001样本，打开图形窗口。X轴选择FSC-H，Y轴选择SSC-H，细胞碎片位于左下角的位置，设门选中目标细胞，如下图：

设门选中要进行细胞周期分析的单细胞群体，排除粘连细胞（粘连在一起的双细胞或多细胞团块等）的影响。X轴选择FL2-W(width)，Y轴选择FL2-A(area)，设门方式如下图：

BD的流式仪采集的数据：在进行周期分析的时候，通常是采用FL2-A与FL2-W（或者FL2-A与FL2H）进行设门。

Beckman的流式仪采集的数据：X轴选择FL3-LIN,用来表示PI的线性信号。Y轴选择FL3-PEAK,用来表示PI的峰值信号。设门方式如下图：

在FlowJo工作台中选中“单细胞群体”这个节点，在菜单栏的“工具”中选择“细胞周期”，打开周期分析窗口。得到G1期、S期、G2期细胞百分比，G1期CV值和G2期CV值等数据。

图中粉色的曲线是周期拟合的模型曲线，黑色的为样本曲线。理想状况是粉色和黑色曲线吻合一致为最佳。拟合的好坏可以根据右边的RMS值来判断。RMS(root mean square error)值越小越好，当周期拟合的不好的时候，可以通过更换拟合模型（Watson和Dean-Jett-Fox）或者更改限制条件确保（G1是G2的两倍）进行调整。

而G1/S/G2百分比：G1/S/G2期细胞所占的百分比。G1/G2均数：G1/G2期细胞荧光强度的平均数。CV（Coefficient of Variation，变异系数）：仪器因素和样品制备及染色过程对标本的人为影响。通常G0/G1峰的CV来检测分辨率或精度。G1 cv/G2 cv：G1/G2峰的变异系数，其大小反映了G1/G2峰的宽度，数值越小，峰越窄。

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