点击GenBank(针对基因序列)，复制下面的基因的序列。

2 Primer Premier 5设计引物

2.1 载入基因序列

通过File下的New或Open载入需要设计引物的DNA序列，如下图示。

2.2 Primer 设置

点击上图的primer选项，出现右图这个界面，再点击search。

2.3 参数设置

主要有五个要设置的地方。

第一栏是选择设计PCR引物，测序引物和杂交探针，这里选择第一个“PCR Primers”； 第二栏是搜寻类型，一般我们搜索引物是以对搜索，所以一般选"pairs"；第三栏是正负链的所在区间以及产物的大小长度，这里是介绍基因的鉴定的，一般以 默认的参数就可以了，不过可以根据实验的需求自行设定；第四栏是引物的长度以及正负波动值，一般来说引物长度在 18-27℃范围内；第五栏是选择模式，一般选 “Automatic”。

设置完上面所说的这些地方后按“OK”键，则跳转到新界面，在点击OK。

2.4 选择合适的引物

该图左上角 这两个按钮和分别代表的是 正向和反向引物。该图中间部分给出了引物的 得分，位置，长度，Tm值，GC含量，自由能等信息。该图最下面的模块给出了正反引物是否形成 发夹结构，二聚体，错配以及引物之间的二聚体等情况， 红色代表有。

2.5 修改引物

点击“Edit Primers”选项，修改引物之间的二聚体，由上图我们可以看出反向引物引物3‘端末尾与正向引物中间碱基互补了，只要删除最后一个碱基就可以了。

2.6 最终引物

最终显示这个界面，说明引物设计好了，

2.7 导出引物

选择 “Edit”>Copy>Sense Primer/Anti-sense Primer ,将引物复制到word 文档里。

后期再为大家一步步的介绍RT-PCR等引物的设计, 这个PCR小技巧学会了吗？

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